薄荷精油的提取分离及l-薄荷醇PLGA抑菌作用的研究

摘要

探究了水蒸气蒸馏法和超临界CO2萃取法提取薄荷精油的工艺优化。正交试验中得出水蒸气蒸馏法提取薄荷精油的最优工艺为料液比为1.6，蒸馏时间为6h，浸泡时间为1h，薄荷精油得率可达到2.20％左右。其中提取时间对薄荷精油得率较显著。正交试验结果表明超临界CO2萃取法提取薄荷精油的最优工艺为提取压力为14MPa，提取温度为60℃，提取时间为15h时，薄荷精油得油率可达到293％左右。其中提取压力对薄荷精油得率较显著。
　　超临界CO2萃取法得出的薄荷精油中检测鉴定出了25种已知成分，水蒸气蒸馏法得出的薄荷精油中检测鉴定出了16种已知成分。在两种方法得出的薄荷精油中成分含量超过1％的组分有:1，8-桉叶素，柠檬烯，L-薄荷酮，薄荷呋喃，新薄荷醇，L-薄荷醇，香芹酮。
　　在从薄荷精油中分离L-薄荷醇的实验中，选择了硅胶柱色谱法作为分离方法，选择石油醚∶乙酸乙酯=80∶1的比例作为洗脱液，采用5％硫酸香草醛溶液作为硅胶柱色谱法的显色溶液。其中薄层色谱(TLC)鉴定中采用石油醚∶乙酸乙酯=8∶1的比例作为展开剂。薄层色谱鉴定结果显示L-薄荷醇组分被很好的分离开来，冷冻结晶实验和GC-MS结果表明，分离L-薄荷醇的纯度高达96.985％。
　　使用PLGA对L-薄荷醇分子进行包裹修饰，使其更好的发挥抑菌作用。扫描电镜表征表明，PLGA已经对L-薄荷醇分子进行了包裹修饰，赋予了L-薄荷醇纳米材料的优点。在L-薄荷醇PLGA对常见致病菌抑制实验中，筛选出其对耐药性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用。CFU实验结果表明，L-薄荷醇PLGA的抑菌活性要高于L-薄荷醇。MIC结果表明L-薄荷醇PLGA对大肠杆菌的MIC值为3.7±0.02μg/mL，对金黄色葡萄球菌的MIC值为5.2±0.04μg/mL。其中L-薄荷醇PLGA对大肠杆菌的抑制效果甚至要超过对照组的氨苄青霉素。LIVE/DEAD实验表明，L-薄荷醇PLGA对细菌细胞的致死率是相当高的，而且随着加药组浓度的提高，死细胞占总细胞的比例是越来越高的，也就是说，随着加药组浓度的提高，细菌细胞的存活率是越来越低的。根据扫描电镜实验结果，可以得出L-薄荷醇PLGA纳米粒子对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的破坏作用，会使其细胞膜发生褶皱，破裂，甚至伴随着内含物的流出。由此可知，L-薄荷醇PLGA纳米粒子的抑菌机制可能是破坏细菌细胞的细胞膜来达到抑菌效果。超薄切片实验表明L-薄荷醇PLGA纳米粒子可进入细菌细胞内部，破坏细菌细胞的细胞壁和细胞膜，从而达到杀死细菌的目的。β-半乳糖苷酶实验表明随着L-薄荷醇PLGA浓度的升高，对大肠杆菌膜结构的损伤越大。随着药物浓度的提高，大肠杆菌膜结构的破坏程度会越来越大;而且经过纳米化修饰之后的L-薄荷醇对大肠杆菌的膜结构破坏程度会有明显提高。

目录

声明

致谢

摘要

缩写和符号清单

文献综述

1．1 薄荷精油概述

1．2 薄荷精油的挥发性组分

1．3 薄荷精油的非挥发性组分

2．1 薄荷精油的抗氧化能力的研究

2．2 薄荷精油的主要化学成分研究

2．3 薄荷精油的抑菌活性研究现状

3．1 PLGA的概念和优点

3．2 PLGA研究进展

1 引言

2 材料和方法

2．1．3 实验试剂

2．2 实验方法

2．2．1 薄荷精油提取工艺的研究

2．2．2 两种方法提取薄荷精油的成分分析

2．2．3 薄荷精油内薄荷醇的分离

2．2．4 L-薄荷醇PLGA纳米粒子的合成及其抑菌活性的研究

3 结果与分析

3．1 薄荷精油提取工艺的研究

3．1．1 水蒸气蒸馏法提取薄荷精油的工艺优化

3．1．2 超临界CO2萃取法提取薄荷精油的工艺优化

3．2 两种方法提取薄荷精油的成分分析

3．3 薄荷精油中L-薄荷醇的分离

3．4 L-薄荷醇PLGA纳米粒子的合成及其抑菌活性的研究

3．4．2 目的菌株的筛选和抑菌活性的研究

3．4．3 LIVE／DEAD实验

3．4．4 扫描电镜(SEM)实验

3．4．5 超薄切片实验

3．4．6 细胞完整性研究

4 讨论

5 结论

参考文献

作者简介

攻读硕士期间的科研成果