原卟啉钠提取工艺的改进及其对丙肝病毒的体外抑制研究

摘要

目的:本研究对原卟啉钠的制备方法进行了改进，以期简化其生产流程。并且体外观察原卟啉钠的细胞毒性作用及其HCV亚基因复制子细胞模型RNA的抑制效果。 方法:将凝固动物血中的蛋白质水解，分离出血红素，经原卟啉、原卟啉甲酯等中间产物，最终精制获得原卟啉钠。根据原卟啉钠的光吸收特性，利用分光光度法对其进行定性和定量检测。 体外实验用CCK-8试剂盒筛Napp无细胞毒性浓度区间。在培养的细胞中依次加入含有药物的完全培养基(药物最高浓度：Napp10mg/ml，IFN106IU/ml，各组药物10倍稀释，共6个浓度级别，PH7.2)10μ1。药物作用72小时后用CellCountingKit-8试剂盒在OD450nm测定细胞活力。然后分别取终浓度为lmg/ml、10-1mg/ml、10-2mg/ml、10-3mg/ml、10-4mg/ml的Napp与含HCV亚基因复制子细胞培养液中共同孵育，同时设空白对照组和IFN-α2b阳性对照组，3天后用荧光定量PCR法检测HCV复制子中RNA的含量。 结果:提取物为红褐色结晶，可溶于水，不溶于氯仿、乙醚及丙酮，易溶于酸性溶液。溶于酸性溶液后纯度为93.8％。体外实验无细胞毒药物浓度区间为0～1000μg/ml，在10μg/m1～1000μg/ml区间内对HCV复制子RNA有明显抑制作用(P＜0.05～0.01)。 结论:利用改良后的方法可将非抗凝动物血精制成原卟啉钠，其纯度为93.8％。体外实验Napp对革巴细胞安全作用范围较宽，且可有效抑制HCV复制子RNA。

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引 言

1丙型肝炎的概况及其治疗

2原卟啉钠制备方法的改进

3原卟啉钠抑制丙型肝炎病毒的体外实验研究

4结论

参考文献

附录A DMEM培养液的配制

致谢

作者简介及读研期间主要成果