猪链球菌病病原流行病学研究及防制措施

摘要

猪链球菌(Streptoeoceus suis)是现代危害养猪业的一种重要的病原，几乎世界各国都有发生。由于链球菌血清型较多，抗原结构复杂，在临床上呈现不同的症状，如败血症、脑膜脑炎、心内膜炎、肺炎、化脓性淋巴结炎、关节炎等，还常常与其他疾病发生合并感染，多发于3-12周龄断奶后的仔猪。这种细菌也从越来越多的哺乳动物(包括人类)及鸟类中分离到，危急到人类的公共卫生安全。 本病的病原体为多种溶血性链球菌，该菌为革兰氏阳性球菌，根据血清学反应，可分为20个血清群，较重要的有A、B、C、D、E、F、L、R等血清群，其中R、F群既可引起猪发病，也可导致人发病，近年来国内外已发生了数起R群的猪链球菌2型感染人的事件。 猪链球菌按其荚膜抗原的差异，可分为35个血清型(1-34及1/2)，猪链球菌2型是其中致病力最强、最常见的一种；此外，猪链球菌1型、7型及9型也可致猪病。对该菌的致病因子及其之间的相互作用机理尚不清楚。 本实验就近几年从各邻近省市采集的猪的病料中，对分离的链球菌的流行情况进行分析研究，同时寻找快速、安全、有效的治疗和控制方法，主要开展了以下工作： 1．2003年-2007年期间，分别从湖北、湖南、江西、河南、安徽等19个省市收集的病猪及病料中，共分离到链球菌472株。 2．采用进口兰氏分群试剂盒A-G群，对472株链球菌进行分群鉴定，由实验结果可知湖北、湖南、江西、河南、安徽等19个省市的链球菌病的血清群分布情况如下：D群占258/472(54.5％)；G群占51/472(10.8％)；D/F群25/472(5.29％)；F群占25/472(5.29％)：C群占4/472(0.84％)；B群占3/472(0.63％)；D/G群占3/472(0.63％)；未能用该试剂盒分群的占103/472(21.8％)。 3．同时合成一对谷氨酸脱氢酶(gdh)引物，运用聚合酶链反应(PCR)方法扩增，筛选出猪链球菌260株(占链球菌的55.1％)。 4．根据相关资料合成主要毒力因子：荚膜多糖(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、细胞外蛋白因子(ef)及溶血素(sly)4对引物对已鉴定的猪链球菌，进一步运用PCR方法鉴定。猪链球菌2型的有101株(占猪链球菌的38.8％)，其中已鉴定了77株猪链球菌2型毒力因子的分布为ef+/sly+/mrp+/有44株(占57.1％)，ef-/sly-/mrp-有9株(占11.7％)，ef-/sly-/mrp+有15株(占19.5％)，ef-/sly+/mrp+有3株(占3.9％)，ef4+/sly-/mrp-有1株(占1.3％)，ef+/sly-/mrp+有2株(占2.6％)，ef-/sly+/mrp-有3株(占3.9％)。 5．对PCR鉴定为猪链球菌2型的菌株，进行葡萄糖、核糖、甘露醇、甘露糖、山梨醇、乳糖、棉子糖、阿拉伯糖、七叶苷、马尿酸盐、淀粉、精氨酸、MR、VP的生化实验。结果发现猪链球菌2型的生化特性差异太大，对糖的发酵不活泼，也不稳定，难于作为分类依据。 6．在2006年7、8月部分省市猪群发病高峰期间，分离并鉴定的优势血清群菌株，并制备成自家苗在三处鉴定为猪链球菌病发生养殖户及地区使用，结合高免血清治疗，能很好的控制疾病的蔓延。

目录

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摘要

第一章文献综述

1.1病原

1.1.1发现历史

1.1.2病原特征

1.1.3链球菌的生化特征

1.2流行病学及其发病机理

1.3 临床症状

1.3.1急性败血症

1.3.2脑膜炎型

1.3.3关节炎型

1.3.4淋巴结脓肿型

1.4病理变化

1.5 血清学鉴定

1.5.1协同凝集试验(应用最广泛)

1.5.2平板凝集试验

1.5.3免疫印迹分析

1.5.4酶联免疫吸附法(ELISA)

1.5.5多克隆抗体的间接免疫荧光法和过氧化物酶-抗过氧化物酶

1.6分子鉴定

1.6.1多位点酶电泳法(MEE)

1.6.2脉冲场凝胶电泳法(PFGE)

1.6.3限制性片段长度多态性分析(RFLP)

1.6.4随机扩增核酸片段多态性分析(RAPD)

1.6.5 PCR法

1.6.6其它

1.7预防与控制

1.7.1加强消毒，净化环境

1.7.2采取药物保健

1.7.3加强饲养管理

1.7.4宣传教育的普及

1.7.5自家苗的应用

第二章病原流行病学

2.1研究目的和意义

2.2材料与方法

2.2.1材料

2.2.2方法

2.3结果与分析

2.3.1猪链球菌病的临床症状

2.3.2细菌的分离鉴定

2.3.3兰氏分群结果

2.3.4链球菌的PCR分型和毒素检测结果

2.3.5猪链球菌2型的生长特性及生化结果

2.4讨论

2.4.1 临床症状的多样性

2.4.2细菌的分离鉴定结果分析

2.4.3乳胶凝集、PCR结果分析

2.4.4毒力因子扩增结果分析

2.4.5生化试验结果分析

2.4.6菌种资源的保存

第三章自家苗在猪链球菌病中的应用

3.1研究目的和意义

3.2材料与方法

3.2.1材料

3.2.2方法

3.3结果与分析

3.3.1细菌鉴定结果

3.3.2患猪链球菌病的猪场使用自家苗的控制情况

3.4讨论

第四章小结

参考文献

致谢