拟南芥N6--mAMP脱氨酶ADAL结构与催化机制研究

目录

第1章 绪 论

1.1 m6A修饰

1.2 ADA蛋白家族

1.3 ADAL蛋白

1.4 嘌呤代谢

1.5 研究目的及意义

1.6 研究方法

1.6.1 蛋白质晶体学

1.6.2 主要研究内容及流程

第2章 野生型AtADAL蛋白结构研究

2.1.1 实验仪器

2.1.2 试剂和酶

2.1.3 菌株和载体

2.2 实验方法

2.2.1感受态细胞制备

2.2.2 PCR扩增目的基因

2.2.3 PCR产物胶回收

2.2.4 双酶切AtADAL基因片段和载体

2.2.5 构建重组质粒

2.2.6 化学法转化重组质粒

2.2.7 小量表达鉴定阳性菌株

2.2.8 菌株扩大培养和表达蛋白

2.2.9 纯化AtADAL蛋白

2.2.10 晶体初筛实验

2.2.11 晶体优化实验

2.2.12 X光衍射晶体数据收集和结构解析

2.3 实验结果

2.3.1 小量表达鉴定阳性克隆菌株

2.3.2 AtADAL蛋白纯化

2.3.3 晶体生长情况

2.3.4 晶体衍射数据收集和结构解析

2.4 本章小结

第3章 AtADAL（D295N）结构研究

3.1 试验仪器与材料

3.2 试验方法

3.2.1 构建AtADAL(D295N)克隆

3.2.2 表达纯化AtADAL（D295N）蛋白

3.2.3 AtADAL（D295N）晶体初筛

3.2.4 晶体优化

3.2.5 衍射数据收集和结构解析

3.3 试验结果

3.3.1 构建AtADAL(D295N)克隆

3.3.2 表达纯化AtADAL（D295N）蛋白

3.3.3 晶体生长情况

3.3.4 晶体衍射数据收集和结构解析

3.4 本章小结

第4章 AtADAL蛋白结构相关研究

4.1 实验仪器和耗材

4.2 试验方法

4.2.1 分子对接

4.2.2 结构比对分析

4.3 实验结果

4.3.1 底物模拟

4.3.2 结构比对分析

4.4 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文

声明

致谢