长链非编码RNA HITT调控肿瘤化疗敏感性的作用及机制研究

目录

第1 章 绪 论

1.1 课题背景

1.2 化疗的研究进展

1.2.1化疗在肿瘤治疗中的作用

1.2.2 化疗耐药性的研究进展

1.3 DNA 损伤应答信号通路研究进展

1.3.1 DNA 损伤应答在细胞生命活动中的作用

1.3.2 DNA 损伤应答在肿瘤中的作用

1.4 ATM 在 DNA 损伤应答信号通路中作用

1.5 ATM 信号通路在肿瘤治疗中的作用

1.6 LncRNA 的研究进展

1.6.1 LncRNA 的概况

1.6.2 LncRNA 在 DNA 损伤应答信号通路中的作用

1.6.3 LncRNA 在调控肿瘤耐药性中的作用

1.7 LncRNA HITT 的研究进展

1.8 研究的目的及意义

1.9 主要研究内容

1.10 技术路线

第2 章实验材料与方法

2.1 实验材料与仪器

2.1.1 实验材料

2.1.2 实验试剂

2.1.3 实验仪器

2.2实验方法和步骤

2.2.1 细胞总蛋白的提取

2.2.2 组织总蛋白和总 RNA 的提取

2.2.3 蛋白免疫印迹

2.2.4 细胞免疫荧光

2.2.5 RNA 的提取及逆转录

2.2.6 细胞瞬时转染

2.2.7 慢病毒的包装与感染

2.2.8 蛋白质免疫共沉淀实验

2.2.9 染色质免疫共沉淀实验

2.2.10 CLIP 实验

2.2.11染色质分离实验

2.2.12 MTT 法检测细胞活力

2.2.13 AnnexinV-FITC 检测细胞凋亡

2.2.14 单细胞凝胶实验

2.2.15 台盼蓝染色检测细胞活性

2.2.16 Caspase 3/7 活性检测实验

2.2.17 质粒克隆

2.2.18 质粒抽提

2.2.19 双荧光素酶报告系统实验

2.2.20 软琼脂克隆形成实验

2.2.21 裸鼠皮下成瘤实验

2.2.22 统计学方法

第3 章致DNA 损伤化疗药物通过上调EGR1 促进HITT表达

3.1 引言

3.2 致 DNA 损伤化疗药物上调 HITT 的表达

3.3 致 DNA 损伤药物 Dox 促进 HITT 转录

3.4 转录因子 EGR1 通过结合 HITT 启动子区调控其表达

3.5 致 DNA 损伤药物 Dox 通过 EGR1 上调 HITT 表达

3.6 本章小结

第4 章 HITT 抑制ATM 活性的作用和机制

4.1 引言

4.2 HITT 通过 ATM 抑制 DNA 损伤修复

4.3 HITT 抑制 ATM 激酶活性

4.4 HITT 抑制 MRN 复合物对 ATM 的募集和活化

4.5 HITT 直接结合 ATM 进而抑制其与 NBS1 的结合

4.6 本章小结

第5 章 HITT-ATM 轴影响肿瘤细胞的化疗敏感性

5.1 引言

5.2 致 DNA 损伤药物 Dox 通过激活 EGR1-HITT 表达促进肿瘤细胞的凋亡

5.3 HITT 通过抑制 ATM 活性调控化疗药物的敏感性

5.4 HITT 通过抑制 ATM 活性增强裸鼠移植瘤对 Dox 的敏感性

5.5结肠癌肿瘤患者组织内HITT与p-ATM表达的相关性分析

5.6 本章小结

结 论

参考文献

附 录

攻读博士学位期间发表的论文及其它成果

声明

致 谢

个人简历