内共生菌Wolbachia对白纹伊蚊线粒体DNA多样性的影响

摘要

目的：
　　调查扬州6个地区白纹伊蚊感染Wolbachia的规律,分析扬州6个地区的白纹伊蚊线粒体DNA COI基因遗传多样性,初步探究内共生菌Wolbachia对白纹伊蚊线粒体DNA COI基因多样性的影响,为将来基于Wolbachia特性对蚊媒及蚊媒病的控制奠定基础。
　　方法:
　　1.2017年7月-10月,采集扬州6个地区的白纹伊蚊,提取单只蚊虫的DNA,利用Wolbachia wsp基因的通用型和分型引物分别进行PCR扩增,统计阳性样本的数量,分析其感染规律。
　　2.利用线粒体DNA COI基因特异性引物对蚊虫DNA样本进行PCR反应,PCR产物经测序仪测序后,通过DnaSP5.1软件分析COI基因的遗传多样性。
　　3.利用生物信息学分析方法,对感染Wolbachia和不感染Wolbachha的白纹伊蚊种群的线粒体DNA多样性进行分析比较。
　　结果:
　　利用Wolbachia wsp基因的通用型引物进行PCR扩增的结果显示,扬州市6个不同地区的白纹伊蚊种群的感染频率在27.5％～67.5％之间;利用A大组和B大组的特异性引物的检测结果为:只感染A组的频率为0～22.5％,只感染B组的频率为5％～17.5％,共同感染A和B的频率为0～35％。
　　对白纹伊蚊COI基因进行PCR扩增,测序所获得的序列用MEGA6.0分析的结果为:A+T含量为67.93％,C+G含量为32.07％,核苷酸多样性(Pi)为0.28190,单倍型多样性(Hd)为0.933。
　　基于COI基因序列构建的进化树表明,邗江区、江都区采样点的白纹伊蚊聚成一小分支后又与广陵区和仪征区聚成一类,高邮市与宝应县采集点的白纹伊蚊单独聚为一支,该结果说明扬州不同的白纹伊蚊种群之间存在一定水平的基因交流。
　　除了广陵区种群以外,其他5个种群中不感染Wolbachia的白纹伊蚊线粒体COI基因的单倍型多样性数(Hd)、核苷酸多样性数(Pi)和核苷酸平均差异数(K)均比感染Wolbachia的要高。
　　结论:
　　1.扬州市白纹伊蚊种群体内感染Wolbachia表现出多样性,有Wolbachia双重感染现象。
　　2.扬州6个白纹伊蚊种群的线粒体DNA COI基因有一定水平的交流。
　　3.感染Wolbachia的白纹伊蚊种群的线粒体DNA COI基因核苷酸多样性和单倍型多样性均低于不感染Wolbachia的白纹伊蚊种群,Wolbachia对寄主的线粒体DNA的多样性具有一定的影响。

目录

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摘要

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注释说明清单

引言

1．1 前言

1．2 实验材料

1．2．1 蚊虫的采集工具

1．2．2 主要仪器与软件

1．2．3 主要试剂

1．3．1 白纹伊蚊的采集方法

1．3．2 白纹伊蚊DNA的提取

1．3．3 自纹伊蚊的鉴定

1．3．4 PCR检测白纹伊蚊体内的Wolbachia

1．4 实验结果

1．4．1 白纹伊蚊DNA的提取结果

1．4．2 白纹伊蚊的鉴定结果

1．4．3 白纹伊蚊感染Wolbachia的结果

1．5 讨论

2 白纹伊蚊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因遗传多样性分析

2．1 前言

2．2 实验材料

2．2．1 主要仪器

2．2．2 主要试剂

2．3 实验方法

2．3．1 白纹伊蚊DNA的提取

2．3．2 COI基因的PCR扩增

2．3．3 毛细管电泳仪检测DNA

2．3．4 产物纯化

2．3．5 白纹伊蚊COI基因的测序反应

2．3．6 COI基因的序列分析

2．3．7 分子系统树构建

2．4 实验结果

2．4．1 COI基因的测序结果

2．4．2 COI基因序列的比对结果

2．4．3 白纹伊蚊COI基因遗传多样性的分析结果

2．4．4 基于COI基因构建的进化树

2．5 讨论

3 Wolbachia对白纹伊蚊线粒体DNA多样性的影响

3．1 前言

3．2．1 实验材料

3．2．2 白纹伊蚊DNA的提取

3．2．3 PCR检测白纹伊蚊体内的Wolbachia

3．2．4 白纹伊蚊COI基因的PCR扩增

3．2．5 PCR扩增产物的纯化

3．2．6 序列的测定与分析

3．2．7 种群遗传分析

3．3．3 Wolbachia对白纹伊蚊线粒体DNA多样性的影响

3．4 讨论

4 结论

参考文献

致谢

作者简介及读研期间主要科研成果