声明
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1 引言
1.1 寨卡病毒
1.2 蛋白4.1R
1.3 研究目的与意义
1.4 技术路线
2 蛋白4.1R在小鼠胚胎成纤维细胞中的表达
2.1 材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.1.4 常用试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 PCR扩增检测蛋白4.1R在4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞中的表达
2.2.3 WesternBlot检测4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞4.1R蛋白水平的表达
2.2.4 pEGFP-4.1R载体的构建
2.2.5 pCMV3-E-HA载体的构建
2.3 结果
2.3.1 4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF 细胞中4.1R基因的PCR扩增结果
2.3.2 4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞中4.1R蛋白水平的表达
2.3.3pEGFP-4.1R（80 kDa）与pEGFP-4.1R（135 kDa）载体的鉴定
2.3.4 pCMV3-E-HA载体的鉴定
2.4 讨论
3 蛋白4.1R对DENV/ZIKV感染的影响
3.1 材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 病毒株
3.1.4 主要仪器仪器
3.1.5 常用试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 实时荧光定量PCR检测4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞中DENV的病毒载量
3.2.3 荧光素酶检测蛋白4.1R对DENV-ⅡLuc+复制子活性的影响
3.2.4 ZIKV的培养
3.2.5 噬斑法检测ZIKV的滴度
3.2.6 实时荧光定量PCR检测4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞中ZIKV的病毒载量
3.2.7 Western Blot检测4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞中ZIKV E蛋白的表达
3.2.8 噬斑法检测子代病毒的感染力
3.2.9 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 蛋白4.1R对DENV感染的影响
3.3.2 蛋白4.1R对DENV-ⅡLuc+复制子活性的影响
3.3.3 噬斑法测定ZIKV的滴度
3.3.4 蛋白4.1R对ZIKV感染的影响
3.3.5蛋白4.1R对ZIKV E蛋白表达的影响
3.3.6 蛋白4.1R对ZIKV子代病毒感染力的影响
3.4 讨论
4 蛋白4.1R对ZIKV感染MEF细胞作用机制的初步探究
4.1 材料
4.1.1 细胞株
4.1.2 病毒株
4.1.4 主要仪器仪器
4.1.5 主要试剂配制
4.2 实验方法
4.2.1 细胞培养
4.2.2 流式细胞术检测4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞表面受体AXL的表达
4.2.3 流式细胞术检测4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞表面受体Tyro3的表达
4.2.4 实时荧光定量PCR检测ZIKV感染4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞后病毒的结合情况
4.2.5 实时荧光定量PCR检测ZIKV感染4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞后病毒的进入情况
4.2.6 电镜检测ZIKV感染4.1R+/+MEF细胞和4.1R-/-MEF细胞后病毒的进入及复制
4.2.7co-IP检测蛋白4.1R与ZIKV E蛋白相互作用
4.2.8 统计学分析
4.3 结果
4.3.1 4.1R+/+MEF和4.1R-/-MEF细胞表面受体AXL和Tyro3的表达
4.3.2 蛋白4.1R对ZIKV结合的影响
4.3.3 蛋白4.1R对ZIKV进入的影响
4.3.4 蛋白4.1R对ZIKV进入及复制的影响
4.3.5蛋白4.1R与ZIKV E蛋白相互作用
4.4 讨论
5 结论与展望
5.1 结论
5.2 展望
参考文献
个人简历、硕士期间发表的学术论文与研究成果
致谢
郑州大学;
