达格列净通过抑制HDAC2反转Kv1.2的低表达缓解糖尿病大鼠的周围神经痛

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中英文缩略词表

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1 实验材料

1.1 实验动物

1.1.1 实验动物

1.1.2 实验分组

1.2 手术器械

1.3 实验仪器

1.4 主要试剂

1.5 耗材

2 实验方法

2.1 疼痛大鼠模型的建立

2.1.1 DPN大鼠模型的建立

2.1.2 CCI大鼠模型的建立

2.1.3 疼痛大鼠经口灌注达格列净并进行用药后血糖和行为学检测

2.1.4 DPN大鼠腹腔注射HDAC2特异性抑制剂Romidepsin

2.2 行为学检测

2.2.2 热缩足潜伏期测定（Thermal paw withdraw latency，TWL）

2.2.3 50%机械缩足阈值的测定（Mechanism paw withdraw threshold， PWT）

2.3 血糖测量

2.4 ELISA

2.4.1 大鼠血清β-HB的检测（美国biovision试剂盒）

2.5 Western Blot技术 免疫印迹实验（western blot）

2.5.1 试剂配制

2.5.2 蛋白提取

2.5.3 蛋白浓度测定（应用索莱宝BCA试剂盒）

2.5.4 Western blot

2.6 免疫荧光技术

2.6.1 试剂配制

2.6.2 灌注取材

2.6.3 冰冻切片

2.7 细胞培养

2.7.1 细胞培养流程

3 数据分析

4 结果

4.1 大鼠注射STZ后体重和血糖变化

4.2 大鼠注射STZ后行为学变化

4.3 使用不同剂量达格列净后大鼠血糖，行为学变化

4.4糖尿病大鼠使用达格列净治疗后血浆β-HB变化

4.5 PDN大鼠注射达格列净后体内HDAC2和KV1.2蛋白表达变化

4.6免疫荧光技术显示PDN大鼠注射高剂量达格列净后体内HDAC2和Kv1.2表达变化

4.7使用HDAC2抑制剂后PDN大鼠行为学变化

4.8使用HDAC2抑制剂后PDN大鼠体内KV1.2蛋白表达变化

4.9 在 CCI 神经病理性疼痛大鼠模型中，使用不同剂量达格列净治疗，大鼠行为学变化

4.10使用 western blot检测达格列净治疗后， CCI大鼠体内HDAC2蛋白表达变化

4.11培养基加入β-HB 组，使用 western Blot检测PC12细胞蛋白表达量变化

5 讨论

6 结论

参考文献

综述:热量限制对糖尿病神经病变的保护作用

参考文献

个人简历

致谢