氨基甲酸酯化合物用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的用途

摘要

本发明涉及通过给药含有化学式1的氨基甲酸酯化合物的药物组合物而用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的用途。

说明书

[技术领域]

本发明涉及下式1的氨基甲酸酯化合物用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的用途——通过给药包含所述氨基甲酸酯化合物的药物组合物：

[式1]

其中

R

[背景技术]

周围神经病变是指由运动神经、感觉神经和自主神经组成的周围神经的结构和功能障碍，并根据其中出现障碍的神经的类型而呈现各种症状。周围神经病变可能是其自身的疾病，或可能由其它疾病如缺血或糖尿病造成，或可能由化疗和放射疗法的副作用造成。症状可能包括嗜睡、自主神经系统变化和感觉变化的各种组合。感觉神经病变尤其表现出阳性症状，包括失去感觉、麻刺感和疼痛，取决于受影响的神经和器官。

在周围神经病变中，作为糖尿病的并发症造成的神经病变最常见，并且大约34%的糖尿病人患有糖尿病性周围神经病变（DPN）。但是，已知的是，50%的糖尿病性周围神经病变是无症状的，这使得该疾病更糟糕。糖尿病性周围神经病变包括感觉异常和疼痛、触诱发痛、痛觉过敏、麻木、肌无力和痉挛。患者无法感觉温度变化或创伤，或由于感觉异常而具有麻木、麻刺、针刺或烧灼痛，并且由于肌无力而具有减弱的反射、平衡和协调。在糖尿病性周围神经病变伴随疼痛的情况下，病理性加剧的疼痛是生活质量降低的主要原因，并且有时伴随着抑郁。

为了从根本上预防或延迟糖尿病性周围神经病变的进展，血糖控制对预防周围神经损伤是基本必要的。治疗包括对因治疗和对症治疗。

通常已使用低剂量三环抗抑郁药如去甲替林或阿米替林、血清素-去甲肾上腺素再摄取抑制剂（SNRI）如度洛西汀和抗惊厥疗法如加巴喷丁或普瑞巴林。此外，对乙酰氨基酚或非甾体抗炎药（NSAID）已用作镇痛药。但是，当前的疗法不足以表现出令人满意的效力，因为它们在20至40%的患者中只有小于30%的疼痛减轻水平（Lancet Neurol. 2015;14: 162-173）。

化疗提高许多癌症患者的存活率但造成各种副作用。其中，化疗诱发性周围神经病变（CIPN）具有68%的患病率，在治疗后数周至数个月仍有症状并且是化疗的代表性副作用，遭受疼痛综合征多年。在化疗剂中，基于铂的药物、紫杉烷类和长春花生物碱类已知造成CIPN，并且它们主要用于结肠直肠癌、胃癌、乳腺癌和血癌的患者。CIPN由包裹神经轴突的髓鞘被化疗损伤引起的神经细胞的变性造成，并且主要症状包括感觉障碍，如疼痛、感觉异常、触诱发痛、痛觉过敏、麻木等；运动神经元障碍，如肌无力、痉挛、张力减退等；和自主神经障碍，如低血压、出汗、胃肠道异常等。

在化疗中，剂量越高，给药频率越短，并且一起给药的药物数量越高，发病的可能性越高。也已知的是，在患者先前具有其它神经病变的情况下，发病率高。

当CIPN发展时，已经以停止化疗或降低剂量以提高周围神经的存活力的方式作出National Comprehensive Cancer Network指南列出的各种尝试。在CIPN的治疗中，适度推荐度洛西汀。此外，三环抗抑郁药、加巴喷丁和阿片样物质的组合和巴氯芬 + 阿米替林 +氯胺酮的三重组合已被提议作为可能的疗法。此外，尽管药效尚未证实，已经使用各种药物如α-硫辛酸、氨磷汀、阿米替林、钙 & 镁等的组合。

[发明公开]

[要解决的问题]

本发明旨在提供预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的方法。

本发明也旨在提供下式1的氨基甲酸酯化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的用途：

[式1]

其中

R

[对问题的技术解决方案]

本发明提供一种用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的药物，其包含治疗有效量的下式1的氨基甲酸酯化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物：

[式1]

其中，

R

A

此外，本发明提供一种用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的药物组合物，其包含治疗有效量的上式1的氨基甲酸酯化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物，和另外一种或多种可药用载体。

此外，本发明提供一种用于预防、缓解或治疗对象的糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的方法，其包括向所述对象给药治疗有效量的上式1的氨基甲酸酯化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物。

此外，本发明提供上式1的氨基甲酸酯化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变或用于改善与其相关的症状的用途。

根据本发明的一个实施方案，在上式1中，R

在本发明的一个实施方案中，卤代-C

根据本发明的另一实施方案，上式1的氨基甲酸酯化合物是下式2的氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基)乙酯：

[式2]

化合物合成领域的普通技术人员可容易地使用已知化合物或可易由其制备的化合物制备上式1和2的氨基甲酸酯化合物。特别地，制备上式1的化合物的方法详细描述在国际公开Nos. WO 2006/112685 A1、WO 2010/150946 A1和WO 2011/046380 A2中，它们的公开内容经此引用并入本文。上式1的化合物可通过上述文献中描述的任何方法化学合成，但这些方法仅是示例性方法，并且如果必要，可以选择性改变单元操作的顺序等。因此，上述方法无意限制本发明的范围。

上式1的氨基甲酸酯化合物可用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变。

糖尿病性周围神经病变是慢性感觉运动神经病变之一并包括痛性糖尿病周围神经病变或糖尿病自主神经病变。

化疗诱发性周围神经病变困扰大约40%的经受化疗的患者，并且症状随所用化疗剂而变 - 例如，抗癌剂的机理和剂量和持续时间。造成化疗诱发性周围神经病变的化疗剂的主要类型包括基于铂的药物、紫杉烷类和长春花生物碱类。

用于预防、缓解或治疗上述疾病的式1的氨基甲酸酯化合物的剂量通常可根据疾病的严重程度、对象的体重和代谢状况而变。用于个体患者的“治疗有效量”是指足以实现上述药理作用，即如上所述的治疗作用的活性化合物的量。基于游离形式和每天一次给药于人类，本发明的化合物的治疗有效量为50至500 mg、50至400 mg、50至300 mg、100至400mg、100至300 mg、50至200 mg或100至200 mg。治疗有效量优选为50至300 mg，更优选50至200 mg。

本发明的化合物可通过用于治疗剂给药的任何常规方法给药，如口服、肠胃外、静脉、肌内、皮下或直肠给药。

上式1的氨基甲酸酯化合物的治疗有效量可通过适当的滴定法实现。根据本发明的一个实施方案，滴定法可包括(1) 向患者每天一次给药12.5毫克式1的化合物持续2周的步骤；(2) 然后向患者每天一次给药25毫克式1的化合物持续2周的步骤；(3) 然后向患者每天一次给药50毫克式1的化合物持续2周的步骤；和(4) 每隔两周增加每天一次50毫克或更少量的式1的化合物直至获得治疗有效量的步骤。根据本发明的另一实施方案，滴定法可包括(1) 向患者给药每天一次50毫克式1的化合物持续2周的步骤；(2) 然后每隔两周增加每天一次50毫克量的式1的化合物直至每天一次给药200毫克式1的化合物的步骤，其中给药式1的化合物持续6周，并且治疗有效量是200毫克/天。根据本发明的再一实施方案，滴定法可包括(1) 向患者给药每天一次50毫克式1的化合物的步骤，其中该量每周增加50毫克直至剂量为100毫克/天，和在步骤(1)后，另外(2) 每周增加该量50毫克直至剂量为200毫克/天的步骤；或(3) 每周增加该量100毫克直至剂量为400毫克/天的步骤，其中式1的化合物可给药2、4或6周，取决于治疗有效量（100毫克/天、200毫克/天或400毫克/天）。

除上述方法外，适当的滴定法还可用于实现式1的化合物的治疗有效量。

根据本发明的另一实施方案，提供一种用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的药物，其包含治疗有效量的上式1的氨基甲酸酯化合物或其可药用盐、溶剂化物或水合物。

糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的症状的实例包括，但不限于，感觉异常、痛觉过敏、触诱发痛、麻木、振动或位置感觉的损失、肌无力、张力减退、痉挛、低血压、出汗或胃肠道异常。

根据本发明的一个实施方案的药物或药物组合物可包含治疗有效量的选自本发明的氨基甲酸酯化合物、它们的可药用盐、溶剂化物、水合物及其组合的化合物。

上式1的氨基甲酸酯化合物的可药用盐的实例包括独立地，乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、酒石酸氢盐、乙酸钙、樟脑磺酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐（estolate）、乙磺酸盐（esylate）、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、羟乙酰对氨基苯胂酸盐（glycoloyl arsanilate）、己基间苯二酚盐（hexylresorcinate）、hydravamine、氢溴酸盐、盐酸盐、碳酸氢盐、羟萘甲酸盐、碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硝酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、扑酸盐（双羟萘酸盐）、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐（subacetate）、琥珀酸盐或半琥珀酸盐、硫酸盐或半硫酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、草酸盐或半酒石酸盐、茶氯酸盐（teoclate）、三乙基碘化物（triethiodide）、N,N'-二苄基乙二胺（benzathine）、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺、普鲁卡因、铝、铵、四甲基铵、钙、锂、镁、钾、钠和锌。

根据本发明的一个实施方案的药物或药物组合物可口服或肠胃外给药。肠胃外给药可包括静脉注射、皮下注射、肌内注射、腹腔内注射、内皮给药、局部给药、鼻内给药、阴道内给药、肺内给药、直肠给药等。在口服给药的情况下，根据本发明的一个实施方案的药物组合物可配制为普通片剂（plain tablet）（无包衣片剂）或使得将活性剂包衣或防止其在胃中降解。此外，该组合物可通过能将活性物质传送到靶细胞的任何装置给药。给药途径可随要治疗对象的一般状况和年龄、治疗病况的性质和所选活性成分而变。

根据本发明的一个实施方案的药物或药物组合物的合适剂量可根据如下因素变化：配制方法、给药方法、患者的年龄、体重和性别、病理状态、膳食、给药时间、给药途径、排泄率和反应灵敏度，并且具有普通技术的医师可容易确定对所需治疗或预防有效的剂量并开出处方。根据一个实施方案的药物组合物可在一剂或多剂中给药，例如每天1至4次。根据一个实施方案的药物组合物可含有，基于游离形式，50至500 mg、50至400 mg、50至300 mg、100至400 mg、100至300 mg、50至200 mg或100至200 mg，优选50至300 mg，更优选50至200mg的量的式1的化合物。

根据本发明的一个实施方案的药物或药物组合物可使用可药用载体和/或赋形剂根据本领域普通技术人员可容易实施的方法配制，由此以单位剂型制备或包含在多剂量容器中。上述制剂可以是在油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳状液（乳化液）、提取物、粉末、颗粒、片剂或胶囊，并可进一步包括分散剂或稳定剂。此外，该药物组合物可以以栓剂、喷雾剂、软膏、乳膏、凝胶、吸入剂或皮肤贴剂的形式给药。该药物组合物也可为哺乳动物给药，更优选为人类给药制备。

可药用载体可以是固体或液体，并且可以是选自填料、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、分散剂、吸附剂、表面活性剂、粘合剂、防腐剂、崩解剂、甜味剂、香料、助流剂、控释剂、润湿剂、稳定剂、悬浮剂和润滑剂的一种或多种。此外，可药用载体可选自盐水、无菌水、林格氏溶液、缓冲盐水、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇及其混合物。

在一个实施方案中，合适的填料包括，但不限于，糖（例如右旋糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖）、淀粉（例如玉米淀粉）、糖醇（例如甘露糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、赤藓糖醇和木糖醇）、淀粉水解物（例如糊精和麦芽糊精）、纤维素或纤维素衍生物（例如微晶纤维素）或其混合物。

在一个实施方案中，合适的粘合剂包括，但不限于，聚维酮、共聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、明胶、树胶、蔗糖、淀粉或其混合物。

在一个实施方案中，合适的防腐剂包括，但不限于，苯甲酸、苯甲酸钠、苄醇、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基甲苯、三氯叔丁醇（chlorbutol）、没食子酸酯、羟基苯甲酸酯、EDTA或其混合物。

在一个实施方案中，合适的崩解剂包括，但不限于，羟基乙酸淀粉钠、交联聚乙烯基吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素、淀粉、微晶纤维素或其混合物。

在一个实施方案中，合适的甜味剂包括，但不限于，三氯蔗糖、糖精、糖精钠、糖精钾、糖精钙、安赛蜜或甜蜜素（sodium cyclamate）、甘露糖醇、果糖、蔗糖、麦芽糖或其混合物。

在一个实施方案中，合适的助流剂包括，但不限于，二氧化硅、胶体二氧化硅、滑石等。

在一个实施方案中，合适的润滑剂包括，但不限于，长链脂肪酸及其盐，如硬脂酸镁和硬脂酸、滑石、甘油酯蜡（glyceride wax）或其混合物。

上式1的氨基甲酸酯化合物可与用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的另外的药物一起使用。

根据本发明的再一实施方案，提供一种用于预防、缓解或治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变的组合，其包含治疗有效量的上式1的氨基甲酸酯化合物和这样的另外的药物。

根据本发明的再一实施方案，另外的药物的实例包括，但不限于，在糖尿病性周围神经病变的情况下，镇痛药，如对乙酰氨基酚或非甾体抗炎药（NSAID），三环抗抑郁药，如去甲替林或阿米替林，抗抑郁药，如单胺氧化酶（MAO）抑制剂，抗惊厥药，如加巴喷丁或普瑞巴林，或巴氯芬 + 阿米替林 + 氯胺酮的组合；和在化疗诱发性周围神经病变的情况下，镇痛药，如对乙酰氨基酚或NSAID，三环抗抑郁药，如去甲替林或阿米替林，抗抑郁药，如MAO抑制剂，抗惊厥药，如加巴喷丁或普瑞巴林，阿片样物质或辣椒素。

在本发明的又一实施方案中，当根据本发明的药物或药物组合物是上述组合时，上式1的氨基甲酸酯化合物[成分(a)]和另外的药物[成分(b)]的重量比(a:b)可在1,000:1至1:1,000、或500:1至1:500、或100:1至1:100、或50:1至1:50、或10:1至1:10的范围内，但不限于此。

本文所用的术语“预防（prevent，preventing，prevention）”是指降低或消除疾病的可能性。

本文所用的术语“缓解（alleviate，alleviating，alleviation）”是指完全或部分改善疾病和/或其伴随症状。

本文所用的术语“治疗（treat，treating，treatment）”是指完全或部分消除疾病和/或其伴随症状。

本文所用的术语“对象（subject）”是指作为治疗、观察或实验的对象的动物，优选哺乳动物（如灵长类动物（例如人类）、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等），最优选人类。

本文所用的术语“治疗有效量”是指在系统、动物或人类中引起生物或医学响应，包括缓解要治疗的疾病或障碍的症状的活性化合物或药物制剂的量，其中由研究人员、兽医、医生（医师）或其它临床医师探寻所述量。

本文所用的术语“组合物”包含含有指定量的特定成分的产品和由指定量的特定成分的组合直接或间接产生的任何产品。

[发明效果]

根据本发明的药物和组合可有效预防、缓解和治疗糖尿病性周围神经病变或化疗诱发性周围神经病变。

[附图简述]

图1显示在所有动物中测得的平均血糖水平（BGL）以确定用链脲佐菌素诱发大鼠的糖尿病。基线平均BGL为102.52 ± 0.93 mg/dl，但在链脲佐菌素给药后3天提高到385.33 ± 7.28 mg/dl。在试验期全程保持升高的BGL，在第14天平均BGL为405.05 ±12.74 mg/dl，在第23天平均BGL为412.52 ± 10.77 mg/dl。由上证实，诱发糖尿病并在试验期间维持。

图2显示与阴性对照组（其中给药媒介物）比较对机械性触诱发痛的预防和治疗效果的结果——通过大鼠的von Frey试验，其中用链脲佐菌素诱发机械性触诱发痛，并给药在制备实施例中制备的氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基)乙酯（下文称为“受试化合物”）和阳性对照化合物（加巴喷丁）。

图3显示与阴性对照组（其中给药媒介物）比较对机械性触诱发痛的预防效果的结果——通过大鼠的von Frey试验，其中用紫杉醇诱发机械性触诱发痛，并给药受试化合物和阳性对照化合物。通过在第1、3、5、7和9天将2 mg/kg的紫杉醇以0.5 ml/kg的剂量腹腔内（IP）给药于大鼠，诱发紫杉醇诱发的周围神经病变。

[实施本发明的具体实施方案]

下面通过工作实施例更详细解释本发明。但是，下列工作实施例仅意在例示一个或多个实施方案并且无意限制本发明的范围。

氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)-2-四唑-2-基)乙酯（下文称为“受试化合物”）根据国际公开No. WO 2010/150946的制备实施例50中描述的方法制备。

购买雄性大鼠（Sprague-Dawley，160至180 g，Harlan Laboratories，Israel）并在动物实验室进行驯化超过1周。实验动物维持在12小时的明暗周期、20至24℃的温度、40至60%的相对湿度下，并自由获取水和食物。

使用von Frey纤丝通过回缩（回避反应）评估疼痛程度。使用up-down方法对右后爪施加机械刺激，并且表现出回避反应的最低弯曲力被定义为缩爪阈值（J NeurosciMethods, 1994；53 (1): 55-63）。首先，将大鼠放置在位于安装在距地面大约35 cm高度的丝网上的亚克力盒（acrylic box）（13 × 25 × 13 cm

进行这一实验以研究在通过链脲佐菌素（STZ）诱发的大鼠糖尿病周围神经痛模型中在两种不同剂量（10 mg/kg和30 mg/kg）下的化合物治疗的镇痛效果。

通过将0.5毫升溶解在柠檬酸盐缓冲液（pH = 6）中的链脲佐菌素（60 mg/kg）注射到大鼠的尾静脉中，诱发糖尿病。在注射前将动物放置在红灯下并锁在束缚装置（restraint device）中以便给药。

在链脲佐菌素（STZ）诱发的糖尿病周围神经痛大鼠模型中，在经大鼠的尾血管注射STZ后的14至24天诱发糖尿病性周围神经病变。使用所有动物在该试验的第3天的血糖水平（BGL）确定是否诱发糖尿病，并在第14天，测试通过von Frey试验表现出机械性触诱发痛迹象的动物的BGL，在实验的第14和23天（图1）。

受试化合物组、阳性对照组和阴性对照组从第14天至第24天每天给药（给药途径：阴性对照组和受试化合物组-PO，阳性对照组-IP）。在实验的第14天和第24天，在阴性对照组、受试化合物组和阳性对照组中在临给药前和在给药后2小时进行疼痛试验。在实验后，所有动物用CO

1) 在10 mg/kg和30 mg/kg的受试化合物下的von Frey试验的结果：

与在第14天和第24天给药媒介物的组相比，在基线下诱发阴性对照组动物的回避反应所需的平均弯曲力为60.00 ± 0.00 g。在实验的第14天，在给药前，归因于机械性触诱发痛的回缩弯曲力明显降低（18.55 ± 2.47 g），在实验的第24天，在给药前，仍存在机械性触诱发痛（23.00 ± 5.35 g）。

在实验的第14天，阳性对照组（加巴喷丁，剂量150 mg/kg IP）的平均弯曲力为51.85 ± 4.91 g，与媒介物的34.50 ± 6.61 g相比没有表现出显著的触诱发痛抑制作用。给药受试化合物（10 mg/kg PO）的组的平均弯曲力为46.09 ± 4.48 g，与媒介物的34.50 ± 6.61 g相比也表现出触诱发痛抑制作用的倾向。给药30 mg/kg PO的受试化合物也表现出触诱发痛抑制作用的倾向（受试化合物30 mg/kg 50.23 ± 3.89 g vs. 媒介物34.50 ± 6.61 g）。

在实验的第24天，阳性对照组（加巴喷丁，剂量150 mg/kg IP）的平均弯曲力为45.30 ± 4.63 g，与媒介物的22.85 ± 3.86 g相比表现出显著的触诱发痛抑制作用。给药受试化合物（10 mg/kg PO）的组的平均弯曲力为44.36 ± 3.63 g，与媒介物的22.85 ±3.86 g相比也表现出显著的触诱发痛抑制作用。给药受试化合物（30 mg/kg PO）的组的平均弯曲力为46.91 ± 4.46 g，与媒介物的22.85 ± 3.86 g相比也表现出显著的触诱发痛抑制作用（图2）。

2) 在10 mg/kg和30 mg/kg的受试化合物下在第14天和第24天的von Frey试验的结果（治疗前 vs. 治疗后）：

在实验的第14天，在阳性对照组的给药前18.15 ± 2.07 g的弯曲力在加巴喷丁（150 mg/kg IP）给药后变成51.85 ± 4.91 g，表明触诱发痛的诱发受到显著抑制。在给药前18.23 ± 2.66 g的弯曲力在受试化合物（10 mg/kg PO）给药后变成46.09 ± 4.48 g，表明触诱发痛的诱发受到显著抑制。在给药30 mg/kg PO的受试化合物的情况下，在给药前18.23 ± 2.17 g的弯曲力在给药后变成50.23 ± 3.89 g，也表明触诱发痛的诱发受到显著抑制。

在实验的第24天，在阳性对照组的给药前25.50 ± 3.95 g的弯曲力在加巴喷丁（150 mg/kg IP）给药后变成45.30 ± 4.63 g，表明触诱发痛的诱发受到显著抑制。在给药前25.18 ± 2.96 g的弯曲力在受试化合物（10 mg/kg PO）给药后变成44.36 ± 3.63 g，表明触诱发痛的诱发受到显著抑制。在给药30 mg/kg PO的受试化合物的情况下，在给药前23.55 ± 2.52 g的弯曲力在给药后变成46.91 ± 4.46 g，也表明触诱发痛的诱发受到显著抑制（图2）。

根据本发明，在链脲佐菌素诱发的DPN大鼠模型中，与最高剂量（150 mg/kg）的加巴喷丁（其是用于治疗DPN触诱发痛的阳性对照）相比，低剂量（10 mg/kg）的受试化合物与阴性对照相比表现出~75%疼痛减轻，这是类似于150 mg/kg加巴喷丁的效力。由这些结果证实，10 mg/kg和30 mg/kg的受试化合物的给药有效抑制机械性触诱发痛。由此可知，受试化合物的给药对糖尿病性周围神经病变有效。

购买雄性大鼠（Sprague-Dawley，160至180 g，Harlan Laboratories，Israel）并在动物实验室进行驯化超过1周。实验动物维持在12小时的明暗周期、20至24℃的温度、40至60%的相对湿度下，并自由获取水和食物。

使用von Frey纤丝通过回缩（回避反应）评估疼痛程度。使用up-down方法对右后爪施加机械刺激，并且表现出回避反应的最低弯曲力被定义为缩爪阈值（J NeurosciMethods, 1994；53 (1): 55-63）。首先，将大鼠放置在位于安装在距地面大约35 cm高度的丝网上的亚克力盒（acrylic box）（13 × 25 × 13 cm

为了诱发周围神经病变，在第1、3、5、7和9天将2 mg/kg的紫杉醇（其是常用于治疗实体癌的抗癌剂）以0.5 ml/kg的剂量腹腔内（IP）给药。为了证实诱发触诱发痛，使用vonFrey试验，并且在该研究中仅包括具有43 g或更小的后爪平均疼痛阈值的动物。

在实验的第13天，仅选择其中通过von Frey试验证实触诱发痛的动物作为实验组。在第13天和第14天，在疼痛试验前2小时口服给药受试化合物（10 mg/kg和30 mg/kg）和作为阴性对照的媒介物。在实验的第13天和第14天，在疼痛试验前30分钟通过腹腔内给药来给药作为阳性对照的吗啡（5 mg/kg）。

通过将紫杉醇给药于大鼠的疼痛诱发模型是化疗诱发性周围神经病变的公知模型。在药物治疗前通过von Frey试验证实通过在第1、3、5、7和9天给药紫杉醇诱发了痛觉过敏，并由在第13天和第14天在药物治疗后的阴性对照组（媒介物给药）的数据证实在实验期间保持痛觉过敏。

在实验的第13天，吗啡给药（5 mg/kg IP）组与媒介物给药组相比表现出对诱发触诱发痛的显著抑制作用。受试化合物给药（10 mg/kg）组与媒介物给药组相比表现出抑制触诱发痛的诱发的倾向，且受试化合物给药（30 mg/kg）组与媒介物给药组相比表现出对诱发触诱发痛的显著抑制作用。

在实验的第14天，吗啡给药（5 mg/kg IP）组与媒介物给药组相比表现出对诱发触诱发痛的显著抑制作用。受试化合物给药（10 mg/kg）组与媒介物给药组相比表现出抑制触诱发痛的诱发的倾向，且受试化合物给药（30 mg/kg）组与媒介物给药组相比表现出对诱发触诱发痛的显著抑制作用。

考虑到在此研究的条件下获得的结果和在生活方式数据中限制的结果（theresults limited in the lifestyle data），证实受试化合物以10 mg/kg剂量的给药在周围神经病变模型中表现出抑制机械性触诱发痛的倾向，并且受试化合物以30 mg/kg剂量的给药在紫杉醇诱发的周围神经病变模型中表现出对机械性触诱发痛的显著抑制。由此可知，受试化合物的给药对化疗诱发性周围神经病变有效。

统计学

通过使用单因素方差分析（one-way ANOVA）和Turkey事后检验（post-test）（Prism