植物提取物对萝卜蚜生物活性筛选及藜活性成分提取和追踪的研究

摘要

本论文以萝卜蚜（Lipaphis erysimi Kaltenbach）为试虫，对5种不同植物乙醇提取物的杀蚜活性进行筛选，并且，以对萝卜蚜具有高生物活性的植物藜（Chenopodium album L.）为研究对象，对其活性成分提取最佳工艺条件进行筛选，并对其活性成分进行初步分离追踪。　　通过筛选发现黄花蒿（Artemisia annua L.）、藜（Chenopodium album L.）、狗尾草（Setaria viridis(L.)Beauv.）、酢浆草（Oxalis corniculata L.）、荇菜（Nymphoides peltatum(Gmel.)O.Kuntze）5种植物乙醇提取物对萝卜蚜均表现出一定程度的综合毒杀效果，其中以黄花蒿和藜的植物提取物表现出的杀蚜活性最高。5种不同种类植物乙醇提取物对蚜虫的触杀校正死亡率，按由高到低排列顺序为：黄花蒿＞藜＞狗尾草＞酢浆草＞荇菜。黄花蒿和藜植物乙醇提取物，在100mg/mL浓度下72h的校正死亡率分别达到70.36%和70.31%。　　通过对比5种植物乙醇提取物不同浓度下对萝卜蚜48h和72h综合毒杀作用的效果，发现5种植物乙醇提取物中，半数致死浓度LC50值最小的是藜，为40.07mg/mL，对应95%置信区间为34.09~47.08mg/mL；其次是黄花蒿，LC50值为45.62mg/mL，对应95%置信区间为30.78~67.62mg/mL。LC50值由低到高排列顺序为：藜＜黄花蒿＜狗尾草＜酢浆草＜荇菜。　　通过对比浸渍法、超声波提取法和索氏提取法三种提取方法，发现超声波提取法为植物藜的最佳提取法，提取率为16.14%。分别以乙醇、石油醚、水和丙酮为提取溶剂，发现植物藜4种不同溶剂提取物对蚜虫的综合毒力大小为：石油醚＞乙醇＞丙酮＞水提取物，以石油醚为提取溶剂的植物藜提取物杀蚜活性最高，在100mg/mL浓度下72h的校正死亡率为82.53%。　　通过试验发现以石油醚和乙醇为溶剂的植物藜提取物对萝卜蚜均表现出极高的触杀作用，在150mg/mL浓度下72h的校正死亡率分别为97.69%和93.82%。对应的LC50值分别为22.43mg/mL和34.70mg/mL。并且，发现以石油醚为溶剂的植物藜提取物对萝卜蚜表现出一定的拒食作用，在150mg/mL浓度下72h的平均拒食率为73.33%。拒食中浓度AFC50=61.73mg/mL，对应95%置信区间为43.04~88.55mg/mL。随着植物藜提取液浓度的增大，蚜虫触杀死亡率和平均拒食率均升高。　　对植物藜乙醇提取物进行初步萃取分离，分离得到石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相萃取物，对应提取率大小为：正丁醇相＞乙酸乙酯相＞氯仿相＞石油醚相＞水相。将各相萃取物对萝卜蚜进行综合毒杀试验，在50mg/mL浓度下72h杀虫校正死亡率大小为：石油醚相＞正丁醇相＞乙酸乙酯相＞氯仿相＞水相。发现其中杀虫活性最高的为石油醚相，校正死亡率为78.82%；同时正丁醇相也表现出较高的杀虫活性，校正死亡率为71.99%。　　对植物藜石油醚相萃取物进行柱层析分离，共得到19个馏分，经薄层层析（TLC）检测，合并相似组分为7个馏分。将各馏分对萝卜蚜进行综合毒杀试验，发现经柱层析得到Ⅳ号和Ⅵ号馏分表现出很高的杀蚜活性。在50mg/mL浓度下72h的校正死亡率分别为62.28%和60.70%。

目录

声明

1 绪论

1.1 课题研究背景

1.2 国内外研究进展

1.3 杀虫植物资源

1.3.1 楝科植物

1.3.2 菊科植物

1.3.3 豆科植物

1.3.4 卫矛科植物

1.3.5 瑞香科植物

1.3.6 杜鹃花科植物

1.3.7 其他科植物

1.4 植物杀虫活性成分

1.4.1 生物碱类

1.4.2 黄酮类

1.4.3 萜烯类

1.4.4 光活化毒素类

1.4.5 其他类

1.5 杀虫作用方式

1.5.1 触杀作用

1.5.2 胃毒作用

1.5.3 熏蒸作用

1.5.4 拒食和忌避作用

1.5.5 其他作用

1.6 植物活性成分的提取方法

1.6.1 浸渍法

1.6.2 索氏提取法

1.6.3 超声波提取法

1.6.4 其他方法

1.7 课题研究目的与内容

2 植物提取物对萝卜蚜生物活性筛选

2.1 研究材料

2.1.1 供试植物

2.1.2 供试昆虫

2.1.3 试验仪器

2.1.4 试验溶剂

2.2 试验方法

2.2.1 植物提取液制备

2.2.2 生物活性测定

2.2.3 数据处理

2.3 结果与分析

2.3.1 5种不同植物提取物对萝卜蚜的毒杀活性

2.3.2 5种植物不同浓度乙醇提取物对萝卜蚜的毒力测定

2.3.3 5种不同植物提取物对萝卜蚜的综合触杀毒力测定

2.4 本章小结

3 植物藜活性成分提取工艺筛选

3.1 试验材料

3.1.1 供试植物

3.1.2 供试昆虫

3.1.4 试验试剂

3.1.3 试验仪器

3.2 试验方法

3.2.1 浸渍法

3.2.2 超声提取法

3.2.3 索氏提取法

3.2.4 生物活性测定

3.2.5 数据处理

3.3 结果与分析

3.3.1 植物藜不同提取方法提取液提取率

3.3.2 植物藜不同溶剂提取液杀蚜活性

3.3.3 植物藜不同浓度提取液杀蚜活性

3.3.4 植物藜提取物对萝卜蚜的拒食作用

3.4 小结

4 植物藜杀蚜活性成分追踪

4.1 试验材料

4.1.1 供试植物

4.1.2 供试昆虫

4.1.3 试验试剂

4.1.4 试验仪器

4.2 试验方法

4.2.1 植物藜活性成分初步分离流程图

4.2.2 植物藜活性成分柱层析分离

4.2.3 薄层色谱检测活性成分

4.2.4 生物活性测定

4.3 结果与分析

4.3.1 植物藜活性成分萃取分离

4.3.2 植物藜各萃取相生物活性

4.3.3 石油醚萃取物柱层析各馏分杀蚜活性

4.4 小结

5 总结

参考文献

个人简历

硕士期间发表的学术论文

致谢