声明
中英文缩略词
引言
第一部分 糖尿病小鼠GSK3β表达与肾脏损伤之间的关系
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 主要仪器和设备
1.3 主要试剂及来源
1.4 主要溶液配制
2 实验方法
2.1 动物实验分组及处理
2.2 标本采集
2.3 实验技术
3 实验结果
3.1 两组小鼠一般情况、体重、肾重、血糖及尿蛋白排泄的对比
3.2 DN小鼠肾脏存在GSK3β过表达,且发生较早,与尿蛋白排泄正相关
3.3 随周龄延长,DN小鼠肾脏病理损伤加重,细胞外基质成分蓄积
4 讨论
4.1 DM与肾脏损伤
4.2 胰岛素抵抗与肾脏损伤
4.3 GSK3β激活与肾脏损伤
5 小结
第二部分 高糖下肾脏固有细胞GSK3β表达与细胞损伤之间的关系
1 实验材料
1.1 细胞来源及培养
1.2 GSK3β过表达质粒来源
1.3 GSK3βsiRNA靶点序列的选择、设计与合成
1.4 主要仪器和设备
1.5 主要试剂及来源RPMI 1640培养基
1.6 主要溶液的配置
2 实验方法与技术
2.1 I型胶原包被培养皿
2.2 细胞培养
2.3 细胞传代
2.4 细胞计数和活力鉴定
2.5 细胞总蛋白的提取
2.6 BCA法测定蛋白浓度
2.7 实验细胞分组
2.8 细胞免疫荧光染色
2.9 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.10 GSK3β过表达对体外培养的肾实质细胞的影响
2.11 GSK3β基因沉默对体外培养的肾实质细胞的影响
2.12 统计学方法
3 结果
3.1 高糖刺激诱导足细胞形态改变,细胞骨架蛋白表达减少,GSK3β和p-GSK3β-Y216过表达
3.2 高糖刺激诱导系膜细胞损伤,细胞外基质蓄积,GSK3β和p-GSK3β-Y216过表达
3.3 高糖刺激诱导肾小管上皮细胞转分化,标记性蛋白表达减少,GSK3β和p-GSK3β-Y216过表达
3.4 GSK3β过表达可加重肾脏固有细胞损伤,下调足细胞SYN和肾小管上皮细胞ZO-1表达,上调系膜细胞FN表达
3.5 GSK3β基因沉默有助于维持足细胞骨架和小管间连接完整性、减少系膜基质积聚
4 讨论
4.1 GSK3β过度活化与足细胞损伤
4.2 GSK3β过度活化与系膜细胞、肾小管上皮细胞损伤
5 小结
第三部分 糖尿病患者尿脱落细胞GSK3β表达与肾脏损伤之间的关系
1 实验材料
1.1 肾组织标本来源
1.2 临床研究对象
1.3 临床资料收集
1.4 患者分组
1.5 主要仪器和设备
1.6 主要试剂及来源二甲苯
1.7 主要溶液的配置
2 实验方法
2.1 石蜡组织切片
2.2 石蜡切片PAS染色
2.3 石蜡切片免疫组化染色
2.4 尿液样本预处理
2.5 尿沉渣细胞总蛋白提取(以下操作在冰上完成)
2.6 BCA法测定蛋白浓度
2.7 免疫印迹法测定尿脱落细胞中GSK3β、GSK3β-Y216/GSK3β的表达
2.8 UAE检测
2.9 血清标本检测
2.10 eGFR采用慢性肾脏病流行病学合作研究组(CKD-EPI)方程(如下表)计算
2.11 统计学方法
3 结果
3.1 不同病理分期时DN肾脏损伤特点
3.2 随DN病理损伤加重,肾脏GSK3β表达异常增高
3.3 随DN病理损伤加重,肾脏GSK3β活性异常增强
3.4 尿脱落细胞中GSK3β表达、活性改变及其诊断DM肾损伤进展的效能分析
4 讨论
4.1 微量白蛋白尿与DM肾损伤
4.2 DM肾损伤的标志物
4.3 尿沉渣脱落细胞GSK3β与DN进展
5 小结
全文小结
参考文献
综述:GSK3β在糖尿病肾病中的研究进展
1 GSK3β的结构与功能
2 糖尿病肾病
3 GSK3β与糖尿病肾病
4 GSK3β与相关调节通路在DN发病的作用
参考文献
个人简历
致谢
郑州大学;