血浆LAMA3测定在肝癌诊断中的应用价值研究

摘要

背景：肝癌起病隐匿，发展迅速，恶性程度高，死亡率在恶性肿瘤中居于第三位，其早期诊断与治疗十分重要。现常用的肝癌筛查方法之一是检测外周血AFP浓度，但其在肝炎和肝硬化、肝损伤呈现高表达，甚至在一些肝癌中表达阴性，因此寻找一个新的特异性强、灵敏度高的生物分子标记物十分重要。　　目的：观察肝癌患者外周血中 LAMA3蛋白和LAMA3 mRNA的表达，探索其对肝癌的诊断价值。　　方法：从河南省人民医院消化内科、肝胆外科及普外科住院患者及正常体检50例肝癌、40例肝硬化、20例胃癌、20例食管癌及20例正常样本以及选自河南省肿瘤医院乳腺外科住院患者20例乳腺癌样本的外周血，离心取上清，存于-80℃冰箱。利用酶联免疫分析测定中 LAMA3蛋白及 AFP含量。Trizol法提取170例血液样本的RNA，然后逆转录合成 cDNA，最后使用LAMA3 PCR扩增引物和GAPDH PCR扩增引物与合成的cDNA进行 RT-PCR，测定各组血清中LAMA3 mRNA表达率及相对定量，并分析 LAMA3蛋白及 mRNA与肝癌患者临床数据的相关性。　　结果：LAMA3蛋白在肝癌患者血浆中的平均值为39.44μg/ml，显著高于肝硬化（18.13μg/ml）、乳腺癌（4.17μg/ml）、胃癌（9.05μg/ml）、食管癌（7.93μg/ml）及正常组（6.22μg/ml），均具有统计学意义（P<0.01）。LAMA3蛋白在 AFP阴性肝癌患者血浆中的平均值为22.15μg/ml，小肝癌患者血浆中平均值为31.25μg/ml，均高于其余组。LAMA3 mRNA在肝癌患者血浆中表达阳性率为72％，显著高于肝硬化（35%）、乳腺癌（5%）、胃癌（25%）、食管癌（20%）及正常组（30%）。ROC曲线分析，LAMA3蛋白临界值为13.23μg/ml，灵敏度及特异性为78%和85%；与 AFP相比，P<0.01。血清 LAMA3蛋白在 AFP阴性肝癌和小肝癌的灵敏度分别为71.4%和83.3%。血清 LAMA3 mRNA在肝癌患者中的灵敏度和特异性分别为72%和70%，在 AFP阴性肝癌患者中的灵敏度和特异性分别为85.7%和70%。LAMA3蛋白与 AFP联合检测肝癌诊断灵敏度升至94%，LAMA3 mRNA和AFP联合灵敏度升至92%,LAMA3蛋白和LAMA3 mRNA联合灵敏度提至94%，三者联合灵敏度升至100%。AFP阴性肝癌中，检测 LAMA3 mRNA及蛋白可以提高肝癌的诊断正确率。LAMA3蛋白与肝癌转移有一定相关性（P=0.031），LAMA3 mRNA与肝癌大小有一定相关性（P=0.024）。　　结论：　　1.肝癌组的LAMA3蛋白及LAMA3 mRNA表达率明显高于肝硬化、乳腺癌、胃癌、食管癌，且与正常组相比，明显高表达，提示其作为肝癌的无创诊断指标是有价值的。　　2.LAMA3蛋白和LAMA3 mRNA在小肝癌及AFP阴性肝癌的诊断中灵敏度及特异性较高，提示其在AFP阴性肝癌及早期肝癌中诊断价值具有一定诊断价值，并可作为AFP的检测的重要补充　　3.LAMA3蛋白及LAMA3 mRNA与AFP两两联合可提高肝癌诊断的灵敏度。　　4.LAMA3蛋白的表达水平与肝癌的转移相关。

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主要英文缩略词索引

引言

一 材料

1.样本

2.实验试剂

3.实验仪器

二.方法

1.血浆LAMA3及AFP蛋白水平检测

2 血浆总RNA提取及纯度测量

3 扩增引物设计

4 cDNA合成

5 实时荧光定量PCR反应

三 数据结果及分析

1 实时荧光定量PCR反应结果

2 酶联免疫分析表达结果及分析

3 LAMA3蛋白及mRNA与人口学因素的关系

讨论

结论

参考文献

综述: LAMA3基因与癌症关系的研究进展

个人简历

致谢