淇河鲫脑型芳香化酶基因(cyp19a1b)的克隆与表达研究

目录

第一章 前 言

1.1 鱼类性别决定相关基因研究进展

1.1.1 雌性性别决定相关基因

1.1.2 雄性性别决定相关基因

1.2 雌激素在鱼类性别决定与分化中的作用

1.2.1 雌激素在鱼类脑中的合成

1.2.2 雌激素合成酶在鱼类脑中的表达定位及作用

1.2.3 雌激素在鱼类性腺中的合成及作用

1.2.4 鱼类脑及性腺中雌激素合成酶基因的差异表达

1.3 本研究的意义

第二章 淇河鲫cyp19a1b 基因cDNA全长的克隆

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1 RNA的提取

2.2.2 淇河鲫cyp19a1b中间片段的克隆

2.2.3 淇河鲫cyp19a1b 3′RACE 及5′RACE

2.2.4 测序序列的拼接

2.3 实验结果

2.3.1 淇河鲫cyp19a1b cDNA全长序列

2.3.2 淇河鲫Cyp19a1b同源性分析及进化树的构建

2.4 讨论

第三章 淇河鲫cyp19a1b mRNA 表达研究

3.1 实验材料

（1） 实验鱼

（2） 实验试剂

（3） 实验药品的配制

3.2 实验方法

3.2.1 总RNA提取及cDNA的合成

3.2.2 实时定量PCR

3.2.3 RT-PCR

3.2.4 组织包埋固定与切片

3.2.5 HE染色

3.2.6 Letrozole处理

3.2.7 腹腔注射hCG

3.3 实验结果

3.3.1 淇河鲫cyp19a1b组织分布

3.3.2 淇河鲫cyp19a1b基因在不同时期的表达模式

3.3.3 Letrozole处理前后cyp19a1b在脑中表达量的变化

3.3.4 腹腔注射hCG对淇河鲫脑中cyp19a1b表达的影响

3.4 讨论

第四章 淇河鲫Cyp19a1b 多克隆抗体制备及蛋白表达定位

4.1 实验材料

4.1.1 实验动物

4.1.2 实验试剂的配制

4.2 实验方法

4.2.1 原核表达

4.2.2 Cyp19a1b多克隆抗体制备

4.2.3 Western blot

4.2.4 免疫组织化学

4.3 实验结果

4.3.1 Cyp19a1b重组蛋白原核表达、纯化及抗体检测

4.3.2 Cyp19a1b在淇河鲫成鱼各组织表达检测

4.3.3 Cyp19a1b在淇河鲫胚胎各时期表达检测

4.3.4 Cyp19a1b在淇河鲫发育各时期脑及性腺中的表达及定位

4.3.5 Cyp19a1b在性逆转淇河鲫脑及性腺中的表达及定位

4.4 讨论

第五章 总结与展望

5.1 全文总结

5.2 研究展望

参考文献

附录

致 谢

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