基于“化学-生物”评价的注射用血栓通（冻干）质量控制研究

摘要

目的：收集临床发生不良反应及未发生不良反应的样品，从化学成分、细胞生物活性变化两方面，探索建立关联注射用血栓通（冻干）粉针临床不良反应（类过敏反应）质量控制方法，为注射用血栓通（冻干）粉针临床安全用药提供基础和依据。　　方法：⑴注射用血栓通（冻干）不良反应样品：采用不干预临床用药，多中心、医院集中监测法，发现、收集和评价注射用血栓通（冻干）不良反应表现，确定正常样品和发生不良反应的样品，为进一步的实验研究奠定了基础。⑵注射用血栓通（冻干）化学成分分析法：采用UPLC方法建立注射用血栓通（冻干）有效组分指纹图谱；UPLC-TQ/MS联用技术，测定注射用血栓通（冻干）化学成分含量信息。⑶注射用血栓通（冻干）致使RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率生物评价方法：建立RBL-2H3细胞的类过敏评价模型，以Compound48/80为阳性药，β-氨基己糖苷酶释放率为评价指标，测定发生与未发生不良反应样品的β-氨基己糖苷酶释放率。　　结果：①注射用血栓通（冻干）不良反应表现：多汗、皮肤过敏性紫癜、眼出血、眶周水肿、无力、胸痛、焦急不安、低血压、高血压、局部麻木、耳鸣为新发现的不良反应；发现的不良反应涉及多个系统的损害，主要类过敏反应。对发生不良反应样品进行关联性评价，确定在29批监测注射液血栓通（冻干）粉针中，9批为很可能发生不良反应的样品，5批为可能发生不良反应的样品，没有发生不良反应的样品共15批。②建立的20批注射用血栓通(冻干)样品的UPLC指纹图谱相似度均大于0.98；测定20批注射液血栓通（冻干）样品的三七皂苷R1、人参皂苷Rg、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd和人参总皂苷含量，结果发生与未发生不良反应的样品五种有效成分均符合规定。③RBL-2H3脱颗粒方法可以在体外评价类过敏反应，5mg组的正常组95%置信区间[1.692、2.4277]，发生不良反应样品的95%置信区间[4.1371、6.2175]；1mg组的正常组95%置信区间[1.3844、2.1563]，发生不良反应样品的95%置信区间[3.774、4.899]；100μg组的正常组95%置信区间[0.6724、1.6107]，发生不良反应样品的95%置信区间[2.2487、3.6023]；测得正常样品与异常样品有显著性差异。　　结论：⑴血栓通（冻干）的不良反应症状轻微，可迅速恢复，类过敏反应为其主要不良反应。⑵⑵血栓通(冻干)所含三七皂苷成分复杂，从几个化学成分和三七总皂苷的含量测定不能控制很好的关联其安全性。⑶RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放率生物评价法从整体细胞水平评价出发，可以对中药制剂的安全性进行评价。⑷研究所建立生物评价方法可以为血栓通(冻干)临床不良反应控制提供依据，RBL-2H3脱颗粒方法可以在体外评价类过敏反应，该方法可以将发生不良反应的样品与正常样品区分开。

目录

声明

前言

第一章 研究背景

第一节 中药注射剂不良反应概况

第二节中药注射液质量控制发展趋势

第三节 注射用血栓通（冻干）临床监测

第二章 基于UPLC特征指纹图谱和含量测定的注射用血栓通(冻干)质量控制研究

第一节注射用血栓通(冻干)UPLC指纹图谱研究

第二节 基于UHPLC-TQ/MS的注射用血栓通(冻干)主要化学成分含量测定

第三章 基于RBL-2H3细胞脱颗粒的注射用血栓通（冻干）的质量一致性研究

1材料与试剂的配置

2 RBL-2H3细胞生物学特性的研究

3 MTT法测注射用血栓通（冻干）细胞毒

4中性红染色