肝郁对雌性大鼠生殖功能和子代鼠的相关影响及柴胡疏肝散的调节作用

摘要

研究背景　　“郁”的概念源于《黄帝内经》，肝郁证经历了一个漫长的历史沿革发展至今，逐渐形成了一个完整的理论思维。肝郁证又称为肝气郁结证,乃因情志不舒、气机郁滞所致的一类临床病证，主要以心情抑郁、情绪不宁、胸胁闷胀或易怒善哭等为临床特征。肝郁证不仅是肝病证候的核心,也是中医肝病发病学的主要环节。近年来，研究者为探讨此证从多系统、多层面进行了大量的文献、实验及临床研究，并取得了较大的进展。认为肝郁证是在悲伤、焦虑、情绪压抑等负性心理应激状态下，表现出的以大脑皮层和自主神经调节机制紊乱为根本原因的神经、内分泌、消化、免疫、循环、感觉、运动等多系统的病理改变。　　在肝郁证的实验研究中，随着研究的不断深入，人们已经逐渐认识到中医证候模型必须以中医基础理论和病因学理论为指导来进行塑造，并不断探索寻求模拟出具有中医证候特征的肝郁证动物模型。肝郁证动物模型的复制,必须要考虑到情志失调在肝郁证发病中的关键作用。而慢性束缚应激动物模型的出现，使得肝郁证研究有了新的出发点和立足点。柴胡疏肝散原方出自《景岳全书》，其主要功效为疏肝理气，现代药理研究发现其有效成分有抗抑郁作用，临床研究也发现柴胡疏肝散对抑郁症的治疗安全有效且耐受性好。　　国内外相关文献关于肝郁与生殖功能异常关系的研究中，身心应激、激素、神经递质及其受体与相关脏腑的功能活动之间的关系成为研究的热点和前沿。肝郁对生殖功能产生影响的调控中枢在脑，肝郁可致单胺类神经递质合成代谢异常及生殖激素分泌紊乱，从而影响生殖机能。课题组前期研究已经证明了慢性束缚应激肝郁证大鼠模型的可行性。而柴胡疏肝散治疗肝郁证的疗效也得到广泛认可和验证。　　本课题在复制慢性束缚应激肝郁证模型大鼠的基础上，观测肝郁对雌性大鼠生殖功能和子代鼠的相关影响及柴胡疏肝散的调节作用，以求证肝郁对大鼠生殖功能和子代鼠的相关影响。　　理论研究　　中医藏象理论肇始于《内经》，肝曰敷和理论首见于《内经》，是对春季里的正常气候变化和自然景象的描述，也是《内经》对肝藏象重要生理功能所做的高度概括。“敷和”为木运之德，既寄肝气之用，又寓肝脏之能。肝木敷布少阳生发之气，决肝胆，宣卫气，调气血，疏津液，协和人体诸脏之能，并使阳气得以舒发、布散。“敷和”既是对肝的基本性质的概括，也是对肝之疏泄、藏血以及与其他脏腑之间的关系的总和。肝曰敷和的功能活动正常，人体气血阴阳协调平衡，气机畅达调和，诸脏维持正常的功能活动。因此，《内经》肝主敷和是肝通过敷布条达人体脏腑气血阴阳,使人体各种功能状态趋于和谐平衡，是对肝的重要生理功能的全面阐释和高度概括，这对于当今深刻认识肝主疏泄功能及其功能演变有所裨益。　　研究方法：　　雌性Wistar大鼠36只，体重240±20g，鼠龄75-80日。在excel表格中随机分为正常组，模型组和柴胡疏肝散组，每组12只。雄性Wistar大鼠9只，体重220±20g，鼠龄85-90日。适应性喂养5天后，采用慢性束缚应激方法复制肝郁证雌性大鼠模型。雄性Wistar大鼠9只正常喂养，暂不予分组。　　分别在实验的第0、7、14、21天观察大鼠宏观表征，称量大鼠体重，在实验的第21天用高架十字迷宫实验记录行为学。慢性束缚应激造模21天后处死半数，通过ELISA法测定大鼠血清中DA的含量变化；通过Western Blot法观察卵巢ERα、ERβ、PR蛋白的表达，qRT-PCR法检测大鼠卵巢ERα、ERβ、PR mRNA的表达；余半数雌鼠与雄鼠交配5日后雌雄鼠分开待产，子代鼠出生后21天，称量子代雌鼠体重及胸腺重量，ELISA法检测子代雌鼠血清中IL-2含量变化。　　结果　　实验一:　　1宏观表征：进行束缚前，各组大鼠精神状况良好，皮毛柔顺，色白有光泽，眼裂洁净红润，耳廓及鼻部皮肤色红润，正常饮食，动作灵活，适度活动，粪便干湿适中。造模结束时，正常对照组与束缚前无明显变化，与正常对照组比较，模型组精神差，情绪低落，体形瘦弱，皮毛微黄凌乱不整洁，活动及饮食减少，大便粪质溏薄，中药组与正常对照组差别不大。　　2体重：造模第7天时，与正常对照组相比，模型组和柴胡疏肝散组大鼠体重均有所降低；造模结束时，与正常对照组相比，模型组体重下降明显，柴胡疏肝散组和正常对照组差别不大。　　3高架十字迷宫实验：造模结束后进行，与正常组相比，模型组大鼠开放臂进入次数减少，停留时间和运动总距离缩短，正常对照组和柴胡疏肝散组差异不明显　　4血清多巴胺含量：与正常对照组相比，模型组多巴胺含量降低，柴胡疏肝散组也降低，但与正常对照组差异不明显。　　实验二：　　1 Western Blot：与正常对照组相比，模型组大鼠卵巢ERα、ERβ、PR蛋白表达减少，柴胡疏肝散组与正常对照组差异不明显。　　2 qRT-PCR：与正常组相比，模型组大鼠卵巢ERα、ERβ、PR mRNA表达减少，柴胡疏肝散对其有调节作用。　　实验三：　　1胸腺指数：与正常对照组21天子代鼠相比，模型组子代鼠胸腺指数降低。　　2血清IL-2含量：与正常对照组子代鼠相比，模型组子代鼠血清IL-2含量降低。结论　　121天慢性束缚应激可以复制出较为理想的肝郁证大鼠模型。　　2肝郁可致雌性大鼠单胺类神经递质代谢异常。　　3肝郁可致雌性大鼠卵巢雌孕激素分泌紊乱从而影响机体的生殖功能。　　4肝郁母体可对子代鼠的免疫功能产生影响。　　5柴胡疏肝散对肝郁证具有一定的治疗作用，并可因此通过影响大鼠卵巢ERα、ERβ、PR蛋白和基因的表达，从而改善机体的生殖功能及子代鼠的免疫功能。

目录

英文缩略词表

前言

1 肝胆敷和 木气生发

2 肝敷卫气 达表抗邪

3 肝木敷和 气血通调

4 肝气敷散 畅达情志

5 肝枢气机 敷布津液

6 肝与其他藏象的关系

实验一 慢性束缚应激肝郁证雌性大鼠模型的建立与评价

材料与方法

结果

小结

实验二 肝郁对雌性大鼠生殖功能影响的实验研究

材料与方法

结果

小结

实验三 肝郁母体对子代鼠影响的实验研究

材料与方法

结果

小结

讨论

1 慢性应激与大鼠肝郁证模型的建立

2 肝郁与生殖功能异常的关系及柴胡疏肝散的调节作用

3 母体产前应激对其子代各系统产生影响

参考文献

结论

1 21天慢性束缚应激建立肝郁证大鼠模型

2 肝郁证雌性大鼠卵巢ERα、ERβ、PR蛋白的检测和ERα、ERβ、PR基因的表达

3 肝郁证雌性大鼠子代鼠免疫功能的检测

致谢

附录1 综述

综述1:肝郁证研究概况及其动物模型研究进展

综述2:肝郁与生殖功能异常关系研究进展

附录二 在校期间发表论文论著情况