电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织氧自由基代谢及海马细胞凋亡影响的实验研究

摘要

目的：血管性痴呆(vascular dementia，VD)是指各种脑血管疾病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合征。属中医学老年呆病范畴。近年来，VD的患病率越来越高，已成为严重影响人们生活质量的重要因素。因此，深入探讨VD的病理机制，开发和研制防治VD的有效方法具有非常重要的意义。本研究根据中医对本病的传统认识和现代研究成果，认为气虚血瘀、瘀阻脑络为本病的基本病机，以“益气活血、祛瘀通络”为基本法则，选用百会、大椎、膈俞、足三里组方，采用双侧颈总动脉结扎的方法复制VD小鼠模型，观察电针对拟血管性痴呆小鼠行为学、海马组织病理形态学、脑组织氧自由基代谢及脑组织海马细胞凋亡等指标的影响，以探讨其作用机制，从而为进一步研发临床防治VD的有效治法提供依据。 方法： 第一部分电针对拟血管性痴呆小鼠行为学及脑组织海马病理形态学的影响参照文献采用双侧颈总动脉结扎的方法复制缺血再灌注血管性痴呆小鼠模型。选用健康雄性昆明小鼠80只，将动物随机分为假手术组、模型组、电针组、尼莫地平对照组。造模时将小鼠用10％水合氯醛(0.35g/kg)腹腔注射麻醉，颈正中部常规消毒后切口，分离双侧颈总动脉，套“4”号丝线扣，拉紧丝扣，阻断血流20min，同时在距尾尖1cm处剪断放血约0.3ml，热凝止血。松开丝扣使血液灌注10min后，再次阻断血流20min，第2次再灌后观察30min，缝合皮肤。其中假手术组只分离颈总动脉，穿线但不结扎，尾部不放血，观察时间与其它组相同。术后当天动物苏醒后开始治疗。电针组选百会、大椎、足三里、膈俞穴，用30号0.5寸毫针刺入，接电针仪，采用疏密波，频率2-80Hz，强度以动物肢体轻轻颤动，但不挣扎嘶叫为度，每次10min；尼莫地平对照组灌服尼莫地平液(30mg/kg体重)；除电针组外，其余各组均采用同一体位固定10min；除尼莫地平组外，其余各组均灌服生理盐水(10ml/kg体重)。治疗由同一操作者操作，每日1次，连续治疗15天。各组均于治疗结束后，进行行为学检测(采用跳台法)，观察小鼠学习记忆能力。然后断头处死小鼠，冰盘上快速剖取全脑，弃去嗅球及小脑。将左侧脑组织置于10％甲醛溶液中固定，常规HE、Nissl染色，光镜下观察脑组织海马CA1区的形态变化。第二部分电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织氧自由基代谢的影响造模方法、分组及治疗过程同第一部分。断头处死小鼠，取右侧脑组织制成10％匀浆，4℃3600r/f min离心5min，提取上清液，用双缩脲法测定蛋白含量，采用硫代巴比妥酸比色分析法测定脑组织MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定脑组织SOD活性。 第三部分电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞凋亡的影响脑组织海马细胞凋亡检测采用末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记(Tunel)法。造模方法、分组及治疗过程同第一部分。断头处死小鼠，将左侧脑组织置于10％甲醛溶液中固定，常规石腊包埋、切片、脱腊，蛋白酶K消化；加样、反应、显色等步骤严格按试剂盒说明书进行；反应结束后，常规封片、镜检并做图像分析，观察各组凋亡细胞数。结果： 第一部分电针对拟血管性痴呆小鼠行为学及脑组织海马病理形态学的影响1 电针对VD模型小鼠行为学的影响模型组小鼠跳台试验的反应时间(51.87±7.79)延长，潜伏期(72.99±10.53)缩短，错误次数(8.00±1.96,8.19±2.21)明显增加，与假手术组(16.72±3.26,262.10±35.29，1.52±0.23，1.38±0.20)比较，具有统计学意义(P<0.01)。电针组(43.10±4.38，167.71±23.36,4.54±0.54,4.08±0.52)、尼莫地平组(47.31±7.01，130.17±27.79,5.14±0.78，5.11±0.74、)与模型组比较，反应时间缩短，潜伏期延长，错误次数明显减少，有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。电针组与尼莫地平组相比，学习成绩之间无显著性差异(P>0.05)，记忆成绩相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 2.电针对VD模型小鼠海马组织病理形态学的影响光镜下形态学观察：假手术组HE染色海马CA1区锥体细胞层结构紧密，层次丰富，细胞核圆而大，核仁清晰；Nissl染色示胞浆内尼氏体丰富，神经纤维密集，排列整齐。模型组HE染色海马CA1区锥体细胞层次不清，细胞明显脱失，细胞结构不完整，排列稀疏、紊乱，细胞核体积变小、深染，呈核固缩表现；Nissl染色示胞浆内尼氏体消失，神经纤维排列紊乱。电针组及尼莫地平组HE染色海马CA1区细胞结构比较清晰，细胞排列紧密，层次丰富，数量明显多于模型组；Nissl染色显示胞浆内尼氏体比较丰富，仅见少数细胞变性、坏死。其中针刺组略优于尼莫地平组。第二部分电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织氧自由基代谢的影响模型组小鼠脑组织MDA含量(10.37±2.19)明显高于假手术组(3.22±0.39)(P<0.01)；电针组(3.87±0.57)及尼莫地平组(5.03±0.75)均低于模型组(P<0.01)；电针组与尼莫地平组比较，电针组低于尼莫地平组，有统计学差异(P<0.05)。 模型组小鼠脑组织SOD活性(13.43±2.44)明显低于假手术组(35.15±4.11)(P<0.01)；电针组(33.35±4.47)及尼莫地平组(30.14±3.06)均高于模型组(P<0.01)；电针组与尼莫地平组比较，电针组高于尼莫地平组，有统计学差异(P<0.05)。 第三部分电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞凋亡的影响模型组(32.77±6.58)可见大量凋亡细胞，假手术组(8.74±1.58)仅见少量散在凋亡细胞，模型组明显多于假手术组(P<0.01)；电针组(25.79±5.57)及尼莫地平(28.75±5.70)组均可见少量散在凋亡细胞，与模型组比较，有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，电针组与尼莫地平组相比，无统计学意义(P>0.05)。 结论：电针对VD模型小鼠具有治疗作用，可显著改善模型小鼠学习记忆能力；减轻因缺血再灌注所造成的海马病理损害；可降低VD模型小鼠脑组织MDA的含量，提高SOD的活性，调节和改善氧自由基代谢，具有增强抗氧化能力的作用；抑制VD模型小鼠脑组织海马CA1区细胞的过度凋亡，促进受损神经元的修复，减轻缺血再灌注损伤。

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摘要

引言

第一部分电针对拟血管性痴呆小鼠行为学及脑组织病理形态学的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织氧自由基代谢的影响

前言

材料与方法

结果

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分电针对拟血管性痴呆小鼠脑组织海马细胞凋亡的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 针刺治疗血管性痴呆的临床和实验研究概况

致谢

个人简历