电针对拟血管性痴呆小鼠海马单胺类神经递质和氧自由基影响的研究

摘要

目的:观察电针对脑缺血再灌注拟血管性痴呆(Vascular Dementia，VD)小鼠的行为学、脑组织海马CA1区病理形态学、单胺类神经递质与氧自由基代谢的影响，并进行不同干预时间的比较，探讨电针治疗VD的效应及作用机制。
　　方法:
　　1.模型复制
　　将60只昆明小鼠随机分为第1批和第2批，每批各设假手术组、模型组、电针组，每组各10只。参照文献，各批电针组和模型组小鼠采用双侧颈总动脉反复缺血再灌注的方法复制VD模型，术前12h禁食水，用10％水合氯醛0.35g/kg腹腔注射，在麻醉状态下，常规消毒，行颈正中切口，将双侧颈总动脉（Common Carotid Artery，CCA）逐层钝性分离，穿线备用，拉紧丝扣阻断血流20min，同时剪断距尾尖1cm处，放血大约0.3ml，采用热凝止血。将丝扣松开使血液灌注10min后，再次阻断血流20min，然后观察30min，缝合伤口。假手术组小鼠只分离双侧颈总动脉，穿线但不结扎，不进行尾部放血，观察时间与电针组和模型组相同。造模后每日肌注青霉素0.2万U，连续3d。为了防止低温对缺血缺氧后脑损伤的保护作用，造模过程中维持动物肛温（36±0.5）℃。
　　2.治疗方法
　　第1批于造模后苏醒当日即开始进行治疗，第2批于造模第3d开始进行治疗。各批电针组选取:大椎、百会、膈俞（双）、后三里（双），用0.35mm×13mm毫针刺入，连接韩氏电针仪，施以疏密波，频率为2/80Hz，强度以小鼠肢体轻轻颤动，不嘶叫挣扎为度，每次针刺10min，1次/d，连续15d。各批假手术组和模型组均采用相同体位固定10min。
　　3.检测方法
　　于治疗结束后，采用跳台实验对各组小鼠进行行为学检测，观察学习记忆能力。行为学检测结束后，断头处死小鼠，在冰盘上快速剖取脑组织，弃去嗅球和小脑，将左侧脑组织固定于4％多聚甲醛溶液，用石蜡包埋，冠状切片，常规HE染色，光镜下观察各组小鼠海马区的病理形态学改变。取右侧海马组织，于电子天平上称重，加入预冷的生理盐水，用电动匀浆器研磨，以镜检无完整细胞为标准，制成10％的海马组织匀浆，4℃，3600r/min，离心5min，提取上清液备用。海马单胺类神经递质NE、DA和5-HT含量测定采用荧光分光光度法;海马SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法;海马MDA含量测定采用硫代巴比妥酸(TBA)比色分析法。
　　结果:
　　1.行为学检测
　　经跳台实验检测，两批模型组小鼠的反应时间均延长，潜伏期均缩短，错误次数均增加，与同批假手术组相比，差异有统计学意义(P＜0.01);两批电针组小鼠反应时间均缩短，潜伏期均延长，错误次数均明显降低，与同批模型组相比，有显著差异(P＜0.01);两批电针组之间比较，学习成绩无明显差异(P＞0.05)，第2批电针组记忆成绩优于第1批电针组（P＜0.05或P＜0.01）。
　　2.海马CA1区病理形态学检测在光镜下观察海马CA1区锥体细胞显示:两批假手术组海马CA1区锥体细胞均排列规整紧密，细胞呈圆形，细胞核大而圆，细胞核仁清晰，核质均匀。两批模型组CA1区锥体细胞排列紊乱、疏松，细胞脱失严重，部分细胞结构不完整，形态欠规则，胞浆与胞核界限模糊，胞核体积固缩变小，核仁呈三角型或多角型，核质不均匀，视野中可见大量坏死细胞。第1批电针组海马CA1区锥体细胞少量脱失，细胞结构比较清晰，细胞排列比较紧密，可见少数细胞核固缩为三角形或多边形;第2批电针组海马CA1区锥体细胞仅有少量脱失，细胞结构比较清晰，细胞排列比较紧密，细胞核大而圆，核仁较清晰，有极少数细胞核固缩为三角形或多边形。
　　3.海马单胺类神经递质的检测两批模型组小鼠海马NE、DA、5-HT含量均明显降低，与同批假手术组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）;两批电针组NE、DA、5-HT含量均明显升高，与同批模型组比较有显著性差异（P＜0.01）;且两批电针组之间比较有差异，第2批电针组DA、5-HT含量高于第1批电针组(P＜0.05或P＜0.01)。
　　4.海马氧自由基的检测与假手术组比较，各批模型组小鼠海马SOD活性均明显下降，MDA含量均显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较，各批电针组海马SOD活性均明显增高，MDA含量均显著降低，有显著性差异(P＜0.01)，且两批电针组之间比较，第2批电针组SOD活性高于第1批电针组（P＜0.05）。
　　结论:采用电针刺激“大椎”、“百会”、“膈俞”、“后三里”穴可以改善因缺血再灌注导致VD小鼠的学习记忆能力;其作用机制可能与电针提高VD模型小鼠海马单胺类神经递质NE、DA、5-HT含量，增强SOD活性，降低MDA含量，改善缺血损伤后海马单胺类神经递质代谢紊乱，提高机体清除自由基的能力，减轻自由基对神经系统的损伤有关。并初步发现，电针干预时间不同，其疗效存在一定差异。

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附表

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结论

参考文献

综述 针灸对血管性痴呆的临床和实验研究进展

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