CDC25A、CDC25B、TGF-beta、Smad3在食管鳞癌中的表达及其在青蒿琥酯抗食管癌中作用

摘要

目的：本研究通过检测食管鳞癌组织中CDC25A、CDC25B、TGF．beta、Smad3的表达及细胞凋亡率、细胞增殖指数，探讨：①CDC25A、CDC25B、Smad3、TGF-beta与食管癌发生发展的关系。②CDC25A、CDC25B、Smad3、TGF-beta表达的相互关系。③CDC25A蛋白含量、定位及CDC25B蛋白含量与细胞凋亡率、增殖指数的关系；通过建立裸鼠Eca-109食管鳞癌移植瘤模型，探讨青蒿琥酯(anesunate，Art)对食管癌的体内抑制作用和机制。 方法： 1、应用免疫组织化学(immunohistochemistⅣ，IHC)S-P法检测52例食管鳞状细胞癌、25例不典型增生组织和24例正常食管粘膜中CDC25A、CDC25B、TGF-beta蛋白的表达。 2、应用流式细胞术(Flow Cvtometrv，FCM)定量检测30例食管鳞状细胞癌和5例正常食管粘膜中CDC25A、CDC25B、Smad3的蛋白含量、细胞凋亡率和细胞增殖指数。 3、构建食管癌裸鼠移植瘤模型，观察Art对移植瘤的抑制情况，计算抑瘤率。免疫组化SP法检测CDC25A、CDC25B蛋白表达变化，病理常规HE巳染色光镜下观察移植瘤改变。 结果： 1、CDC25A在不同食管组织中的表达应用IHC法检测52例食管鳞状细胞癌、25例不典型增生组织和24例正常粘膜中CDC25A的表达，结果显示：CDC25A在癌组织中的阳性表达率(50.0％)明显高于非典型增生组织(16.0％)和正常粘膜(O％)(P<0.01)，后二者之间差别无显著性(P>0.05)。CDC25A的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)，但与细胞分化程度(P<0.01)、纤维膜浸润(P<0.01)、淋巴结转移有关(P<0.05)。应用FCM法对30例食管鳞状细胞癌和5例正常粘膜中CDC25A蛋白含量(Fluscence Index，FI)的检测结果显示：癌组织中CDC25A蛋白含量(1.15±0.09)高于正常粘膜(1.00±0.06)(P<0.01)。且CDC25A蛋白含量与浸润深度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)有关，而与细胞分化程度和患者的性别、年龄无关(P>0.05)，此结果与IHC结果基本一致。 2、CDC25B在不同食管组织中的表达应用IHC法检测52例食管鳞状细胞癌、25例非典型增生组织和24例正常粘膜中CDC25B蛋白的表达，CDC25B在癌组织中的阳性表达率(48.1％)明显高于非典型增生组织(16.0％)和正常粘膜(0％)(P<0.01)，后二者之间差别无显著性(P>0.05)。CDC25B的表达与患者的性别、年龄、淋巴结转移无关，但与细胞分化程度、浸润深度相关(P<0.01)。 应用流式细胞术(FCM)对30例食管鳞癌和5例正常粘膜中CDC25B蛋白含量(FI)的检测结果显示：CDC25B蛋白在癌组织(1.11±0.11)中的含量高于正常粘膜(1.00±0.06)(P<0.05)；但其蛋白含量仅与食管鳞癌浸润深度有关(P<0.05)，与细胞分化程度、淋巴结转移及患者性别、年龄均无关(P>0.05)，此结果与IHC结果基本一致。 3、TGF-beta在不同食管组织中的表达应用IHC法检测52例食管鳞状细胞癌、25例非典型增生组织和24例正常粘膜TGF-beta蛋白的表达，癌组织中的TGF_beta蛋白阳性表达率(67.3％)明显高于非典型增生组织(36.0％)和正常粘膜(33.3％)(P<0.01)，后二者差别无显著性(P>0.05)。TGF-beta蛋白的表达与淋巴结转移相关(P<0.05)，与浸润深度、分化程度及患者性别、年龄无关(P>0.05)。 4、Smad3在不同食管组织中的表达应用FCM法检测30例食管鳞状细胞癌和5例正常粘膜中Smad3蛋白含量(FI)，结果显示：Smad3蛋白在癌组织(0.92±0.06)中的含量低于正常粘膜(1.00±0.07)(P<0.05)；但其含量与食管鳞癌组织的浸润深度、细胞分化程度、淋巴结转移及患者性别、年龄无关(P>0.05)。 5、食管鳞状细胞癌中CDC25A蛋白与CDC25B蛋白的表达无明显相关关系(x<'2>=3.78，P>0.05)(IHC)。 6、食管鳞状细胞癌中TGF-beta蛋白与CDC25A蛋白的表达无明显相关关系 (x<'2>=2.19，P>0.05)(IHC)。 7、食管鳞状细胞癌中TGF-beta蛋白与CDC25B蛋白的表达无明显相关关系 (x<'2>=3.53，P>0.05)(IHC)。 8、食管鳞状细胞癌中CDC25A蛋白与Smad3蛋白含量之间呈负相关关系(r=-O.482，P<0.01)(FCM)。 9、CDC25A蛋白含量(FI)与细胞凋亡率和细胞增殖指数的关系(FCM)。 CDC25A蛋白含量(FI)与细胞凋亡率无相关关系(P>0.05)。但按IHC结果将对应的30例标本分为胞浆CDC25A蛋白阳性表达组和胞浆CDC25A蛋白阴性表达组分析发现，胞浆CDC25A蛋白阳性表达组的细胞凋亡率(6.62±2.01)低于胞浆CDC25A蛋白阴性表达组(8.53±4.32)，但无统计学意义(P>0.05)。CDC25A蛋白含量(FI)与细胞增殖指数不相关(P>0.05)，按IHC结果将30例标本分为CDC25A蛋白核膜阳性表达组和核膜阴性表达组分析发现，CDC25A蛋白核膜阳性表达组的细胞增殖指数(30.71±12.04)明显高于CDC25A蛋白胞核膜阴性表达组(21.78±8.22)(P<0.01)。 10、CDC25B蛋白含量(FI)与细胞凋亡率、细胞增殖指数均无相关关系(P>0.05)(FCM)。 11、CDC25B蛋白与Smad3蛋白之间无相关关系(FCM)(P>0.05)。 12、An对人食管癌裸鼠移植瘤的生长影响及其机制(1)成功构建出人食管癌裸鼠移植瘤模型，成瘤率达100％。(2)Art显著抑制移植瘤的生长：100mg/kg、200mg/kg、300mg/kgArt组的体积抑瘤率分别为30.30％、74.76％、36.36％，重量抑瘤率分别为29.35％、65.22％、32.61％，顺铂体积抑瘤率为74.75％，重量抑瘤率为64.13％。200mg/kgAn浓度抑瘤效果最佳，与顺铂作用相似。(3)CDC25A阳性标记率，AIrt治疗组均低于生理盐水组(P<0.05)，200mg/kgArt组低于100mg/KgArt组和300mg/kgArt组(P<0.05)，100mg/kgArt组和300mg/kgAn组无差异(P>0.05)。(4)CDC25B在各组均表达，各组阳性标记率差异无显著性(P>0.05)。 结论： 1、CDC25A在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于非典型增生组织和正常粘膜，提示CDC25A过表达可能与食管癌的发生有关；CDC25A表达与细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移相关，提示CDC25A可能参与调节食管癌的恶性表型，并促进食管癌的浸润与转移。 2、CDC25B在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于非典型增生组织和正常粘膜，提示CDC25B过表达可能与食管癌的发生有关；CDC25B表达与分化程度、浸润程度有关，与淋巴结转移无关，提示CDC25B可能只在食管癌的早期发挥作用，但并不参与食管癌的转移。 3、TGF-beta在食管鳞状细胞癌中的表达高于非典型增生组织和正常食管粘膜，提示TGF-beta过表达可能与食管癌的发生有关，TGF-beta过表达与淋巴结转移相关，提示其可能促进食管癌的转移。 4、在食管癌组织中，CDC25A、CDC25B表达不相关，CDC25A蛋白与Smad3蛋白表达呈负相关，CDC25B与Smad3蛋白表达不相关，提示CDC25A、CDC25B存在不同的调节机制，且在食管癌的发生发展中可能无协同作用。 5、Smad3蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达低于正常粘膜，且与CDC25A蛋白表达呈负相关，提示食管鳞癌中Smad3蛋白表达的下调可能减弱了泛素-蛋白酶体对CDC25A蛋白的降解作用，进而导致了CDC25A蛋白含量升高。 6、食管癌组织中核内CDC25A蛋白可能有促增殖作用。 7、Art可显著抑制裸鼠移植瘤的生长，且无明显的毒副作用，抑制CDC25A是An发挥抑瘤作用的重要机制。

目录

摘要

引言

第一部分CDC25A、CDC25B、Smad3、TGF-beta在食管鳞癌中的表达及生物学意义

前言

材料与方法

结果

附图1

附图2

附表

讨论

结论

参考文献

第二部分青蒿琥酯对人食管癌裸鼠移植瘤的生长影响及其机制研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：CDC25家族的生物学特性及与肿瘤关系的研究进展

致谢

个人简历