利用基因编辑技术降低酿酒酵母细胞壁稳定性的研究

目录

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第一章 绪 论

1.1 酿酒酵母的概述

1.2.1 酿酒酵母细胞壁的结构

1.2.2 酿酒酵母细胞的破壁方法

1.2.3 与酿酒酵母细胞壁有关的基因

1.3.1 CRISPR/Cas系统的发现

1.3.2 CRISPR/Cas系统的组成

1.3.3 CRISPR/Cas系统的分类

1.3.4 CRISPR/Cas系统的作用机制

1.3.5 CRISPR/Cas9系统的应用

1.4 本研究的目的及意义

第二章 酿酒酵母SNF1、DCW1、ROM2、SIT4 多基因编辑

2.1 实验材料

2.1.1 菌株和质粒

2.1.2 培养基

2.1.3 实验试剂

2.1.4 实验主要仪器

2.1.5 引物名称及序列

2.2.1 技术路线

2.2.2 SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表达质粒的构建

2.2.3 酿酒酵母感受态的制备

2.2.4 重组质粒转化酿酒酵母感受态细胞

2.2.5 验证转化子

2.2.6 突变体的筛选

2.2.7 电激法去除突变株细胞中的质粒

2.2.8 以酿酒酵母2.558菌株为出发菌对SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因进行叠加编辑

2.3 实验结果与分析

2.3.2 测序验证SNF1、DCW1、ROM2、SIT4基因的gRNA/Cas9共表达质粒的正确构建

2.3.3 阳性转化子的选择

2.3.4 突变体的获得

2.3.5 电激法去质粒

2.3.6 突变株2.558-IV的获得

2.4 本章小结

第三章 温度对酿酒酵母突变株2.558-IV细胞壁稳定性的影响

3.1.1 菌株

3.1.2 培养基

3.1.3 实验试剂

3.1.4 实验主要仪器

3.2.1 技术路线

3.2.2 菌株的培养

3.2.3 样品前处理

3.2.4 可溶性蛋白质含量的测定

3.2.5 GSH含量的测定

3.3 实验结果与分析

3.3.1 可溶性蛋白质含量

3.3.2 GSH含量

3.4 本章小结

第四章 结 论

参考文献

致 谢

攻读学位期间取得的研究成果