选择性COX-2抑制剂塞来昔布对人淋巴瘤细胞株Raji增殖、凋亡及Survivin表达影响的研究

摘要

目的：恶性淋巴瘤是淋巴干细胞分化异常克隆性增殖的肿瘤，为儿童期常见的恶性肿瘤之一，发病率有逐年增高之势。目前传统化疗仍是其治疗的主要手段，但耐药是影响长期生存的重要因素之一。因而，寻求一种更为有效的防治措施对改善患儿的预后和生活质量具有十分重要的意义。非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti innammatory dmgs，NSAIDs)塞来昔布(Celecoxib)是环氧合酶(cyc100xygenase，COX)中COX．2的选择性抑制剂，已有研究表明其对多种肿瘤具有抑制作用。普遍认为其抗肿瘤的作用机制通过两条途径：COX-2依赖性途径和非COX-2依赖性途径，但具体机制未完全阐明。Survivin是新近发现的抑制凋亡蛋白(inhibitibor ofapoptosis protein，LAP)家族中的成员之一，作为一种多肿瘤抑制基因，其在肿瘤细胞的凋亡过程中起调控作用。有研究证实Survivin能抑制某些化疗药物诱导的凋亡，这使其有望成为肿瘤治疗的潜在新靶点。目前有关Survivin表达与Celecoxib诱导淋巴瘤细胞凋亡关系的研究文献报道罕见。本实验通过体外培养人Burk"s淋巴瘤Raii细胞，观察选择性COX-2抑制剂Celecoxib对Raii细胞增殖、凋亡及细胞周期分布的影响，并检测Survivin在细胞中的表达情况，初步探讨Celecoxib对恶性淋巴瘤的作用及其抗肿瘤的非COX-2依赖性途径之可能机制，为Celecoxib的临床应用提供理论依据。 方法：体外培养人Burk''s淋巴瘤Raii细胞，用不同浓度的Celecoxib进行干预。应用MTT比色法检测细胞生长情况；流式细胞术(FCM)分析Celecoxib对细胞周期的影响并检测细胞凋亡及Survivin蛋白在细胞中的表达情况；应用RT-PCR法检测细胞中SuⅣivin mRNA的表达水平。 结果： 1 MTT比色试验结果表明：Celecoxib各浓度组作用于Raji细胞24h后抑制率分别为9.44％，23.08％，55.53％，73.00％；48h后抑制率分别为29.10％，53.25％，71.86％，88.01％；72h后抑制率分别为37.88％，62.92％，78.57％，93.87％。各实验组作用于Raii细胞24、48、72h后吸光度值与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)，同时各浓度组之间以及时间组之间有显著性差异(P<0.05)。 2 流式细胞术检测结果显示：Celecoxib各浓度组作用于Raii细胞48h后出现明显的凋亡峰，凋亡率分别为(9.20±0.19)％，(23.07±1.77)％，(35.66±1.05)％，(44.63±1.34)％；对照组未见凋亡峰或仅有低平的凋亡峰，其凋亡率为(2.23±0.91)％。用最小显著差法两两比较，各实验组与对照组相比均具有显著差异(P<0.05)。经单因素方差分析，各浓度组间Celecoxib对细胞凋亡率的影响有显著差异(P<0.05)。 3 流式细胞术检测结果显示：Celecoxib各浓度组作用于Raii细胞48h后，Celecoxib各处理组GO/G1期细胞比例分别为(58.53±1.12)％， (64.97±0.60)％，(69.17±0.40)％，(73.83±0.35)％；S期细胞比例分别为(28.70±1.32)％，(23.87±O.59)％，(21.07±O.67)％，(17.17±O.49)％；G2/M期细胞比例分别为(12.77±O.21)％，(11.17±0.35)％，(9.77±0.35)％，(9.0±0.26)％。对照组处于G0/G1期，S期，G2/M期细胞比例分别为(53.50±1.35)％，(32.80±1.61)％，(13.70±0.40)％。与对照组相比，Celecoxib各实验组细胞周期分布发生明显变化(P<0.05)。经单因素方差分析，各浓度组间Celecoxib对细胞周期的影响有显著差异(P<0.05)。 4 流式细胞术检测结果显示：12.5mol/L，50μml/L，10μmol/L，15μmol/L Celecoxib各处理组作用Raii细胞48h后Survivin蛋白表达定量分析F1分别为0.95±0.022，0.81±0.044，0.72±0.039，0.64±0.056。对照组的Survivin蛋白表达FI被看作为1，12.5μmol/L Celecoxib组与对照组间无显著性差异(P>0.05)；而Celecoxib其余浓度组Survivin蛋白表达率与对照组相比，差异均具有显著意义(P<0.05)。Celecoxib不同浓度组间下调Survivin蛋白表达FI具有显著性差异(P<0.05)。 5 RT-PCR检测结果显示：12.5μmol/L，50μmol/L，10μmol/L，15μmol/L Celecoxib各处理组作用Raji细胞48h后Survivin mRNA相对表达量分别为0.73±0.033，0.67±0.038，0.61±0.013，0.54±0.039。对照组的Survivin mRNA相对表达量为0.79±0.018，Celecoxib各浓度组SurviVin mRNA相对表达量与对照组相比，差异均具有显著意义(P<0.05)。Celecoxib不同浓度组间下调SurviVinmRNA相对表达量具有显著性差异(P<0.05)。 结论： 1 Celecoxib体外对Raii淋巴瘤细胞生长具有明显的抑制作用，且在12.5～15μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性。 2 Celecoxib使Raii细胞GO/G1期细胞数增多，S和G2/M期细胞数减少。通过阻滞细胞周期于GO/G1期，抑制Raii细胞的增殖，此可能为非COX-2依赖性途径作用机制之一。 3 本研究观察到，药物干预前，Raii淋巴瘤细胞中SurvivinmRNA与Survivin蛋白的一致性高表达，提示Raii淋巴瘤细胞中Survivin在转录和蛋白质翻译水平上表达均增加。 4 Celecoxib体外可抑制Raji淋巴瘤细胞中SurVivin蛋白及Survivin mRNA的表达，并呈明显的剂量依赖关系，认为Celecoxib诱导Raji淋巴瘤细胞凋亡的作用部分是通过下调Survivin表达来实现的，这可能是其又一抗肿瘤的非COX-2依赖性途径之机制。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述选择性COX-2抑制剂与恶性肿瘤

致谢

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