血管紧张素AT1受体通路激活人脐静脉内皮细胞PP2A导致eNOS Ser1177磷酸化水平下调的机制

摘要

目的：　　探讨血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）/血管紧张素Ⅱ1型受体（AngiotensionⅡ Receptor1，AT1R）通路激活人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）PP2A（Protein Phosphatase2A，PP2A）导致eNOS Ser1177磷酸化水平下调的分子机制。　　方法:　　首先明确AngⅡ下调HUVECs中eNOS Ser1177的浓度及时间依赖效应，将 HUVECs随机分为正常对照（Control）组和AngⅡ处理组（AngⅡ浓度分别为1.0×10-9mol/L、1.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L和1.0×10-5mol/L），AngⅡ处理时间分别为12h、24h和36h。然后根据AngⅡ下调eNOS Ser1177的浓度和时间效应，进一步探讨eNOS Ser1177下调的分子机制，将 HUVECs随机分为4组，分别为正常对照（Control）组、AngⅡ处理组（AngⅡ终浓度为1.0×10-7mol/L和1.0×10-6mol/L，处理12h）、单纯CAN组[采用AT1R阻断剂坎地沙坦（candesartan，CAN)终浓度为1.0×10-6mol/L，预处理3h］和CAN+AngⅡ组（CAN的使用浓度和时间同单纯CAN组，AngⅡ的使用浓度和时间同AngⅡ处理组）。用Western blot方法检测各组eNOS蛋白表达、eNOS Ser1177位点磷酸化水平、PP2A-Cα蛋白表达、PP2Ac-Tyr307位点磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I2PP2A的表达水平。采用化学比色法检测各组细胞培养基中NO含量。　　结果：　　①与Control组比较，给予1.0×10-9mol/L、1.0×10-8mol/L、1.0×10-7mol/L、1.0×10-6mol/L、1.0×10-5mol/L的AngⅡ分别处理 HUVECs12h、24h、36h后，eNOS Ser1177磷酸化水平均下调（p<0.05），AngⅡ各组间eNOS Ser1177磷酸化水平差异无统计学意义，而各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学意义。②与同一浓度AngⅡ处理12h组比较，CAN预处理组可上调eNOS Ser1177磷酸化水平，而eNOS蛋白表达水平差异无统计学意义。③与Control组比较，AngⅡ处理12h后PP2Ac-Tyr307磷酸化水平下调（p<0.05）；与同一浓度AngⅡ处理12h组比较，CAN预处理组可上调PP2Ac-Tyr307磷酸化水平（p<0.05），而各组间PP2A-Cα蛋白表达差异无统计学意义。④与Control组比较，AngⅡ处理12h后PP2A内源性抑制蛋白I2PP2A的表达减少（p<0.05）；与同一浓度AngⅡ处理12h组比较，CAN预处理组可增加PP2A内源性抑制蛋白I2PP2A的表达（p<0.05）。⑤与Control组比较，AngⅡ处理12h后细胞培养基中NO含量减少（p<0.05）；与同一浓度AngⅡ处理12h组比较，CAN预处理组可增加细胞培养基中NO含量（p<0.05）。　　结论：　　AngⅡ可通过AT1R通路导致人脐静脉内皮细胞eNOS Ser1177磷酸化水平下调，NO产生减少，这一效应可能与通过降低PP2A内源性抑制蛋白I2PP2A的表达和PP2Ac亚基的Tyr307位点磷酸化水平，导致PP2A活性增强相关。而AT1R阻滞剂CAN预处理，可通过增加I2PP2A的表达，上调PP2Ac亚基Tyr307位点磷酸化水平，最终导致eNOS Ser1177磷酸化水平和eNOS活性恢复，从而为临床防治与内皮功能障碍相关的心脑血管疾病提供实验依据。

目录

声明

英文缩略词表

引言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结 果

第一部分 血管紧张素Ⅱ通过AT1R通路下调eNOS Ser1177磷酸化水平

第二部分 血管紧张素Ⅱ/AT1R通路激活PP2A的分子机制

3 讨 论

4 结 论

5 本研究下一步研究计划

参考文献

附录

综述:肾素血管紧张素系统与心肺疾病及糖尿病的研究进展

作者简历

致谢

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