先心病相关基因NKX2.5、MTHFR多态性位点(SNP)与成年人心血管疾病的相关性

摘要

目的：探讨心脏特异性同源盒转录因子（Homobox transcription factor，NKX2.5）基因rs3729753、rs2277923和亚甲基四氢叶酸还原酶（Methylene Tetrahydrofolate Reductase，MTHFR）基因rs1801131、rs1801133单核苷酸多态性（Single neucleotide polymorphism，SNP）与成人心血管疾病和小儿先天性心脏病的遗传易感性以及基因间的关联性；MTHFR相关血清学标志物同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）对心血管疾病的临床诊断价值及与MTHFR基因的相关性。　　方法:运用循证医学中系统评价定性原理和Meta分析定量方法对MTHFR基因C677T（rs1801133）多态性与心血管疾病的相关性进行分析；采用病例-对照研究收集标本，正常对照组105例和成人心血管疾病108例，正常对照组53例和小儿先心病49例；收集研究对象的一般临床资料并检测血清同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平；运用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）对NKX2.5基因rs3729753、rs2277923和MTHFR基因rs1801131、rs1801133的多态性位点进行序列扩增，一代测序技术检测各位点的基因分型分布；采用卡方检验对四个多态性位点与心血管疾病的风险进行关联分析，和各位点的基因型组合分析，采用单因素方差分析rs1801131、rs1801133位点各基因型与血清Hcy水平的相关性；Logistic回归分析心血管疾病的危险因子；绘制ROC曲线评价Hcy与各种危险因子对诊断心脏病的临床价值。 结果：循证医学Meta分析结果显示在以下5个遗传模型中合并分析时，均存在MTHFR C677T基因多态性与心血管疾病发病的显著相关性：等位基因模型（T vs C）[OR=1.39，95%CI（1.17，1.65），P=0.0002]；纯合子模型（TT vs CC）[OR=1.57，95%CI（1.16，2.12），P=0.003]；杂合子模型（TC vs CC）[OR=1.69，95%CI（1.26，2.27），P=0.0004]；显性遗传模型（TT+TC vs CC）[OR=1.53，95%CI（1.21，1.94），P=0.0005]；隐性遗传模型（TT vs TC+CC）[OR=1.37，95%CI（1.08，1.73），P=0.01］。亚组分析时，在以下亚组中显示出更高的发病风险：冠心病组，隐性遗传模型[OR=1.38，95%CI（1.17，1.62），P=0.0001]；心肌梗死组，等位基因模型[OR=1.71，95%CI（1.37，2.13），P＜0.00001]；年龄＜50岁组，纯合子模型[OR=2.23，95%CI（1.58，3.17），P＜0.00001]。正常对照组与心血管疾病组在甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、脂蛋白(a)[lipoprotein alpha，LP(a)]、同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)水平上有统计学差异（P<0.05)；在正常对照组和疾病组的基因型分布频率中，经非条件Logstic回归分析，rs1801131、rs1801133、rs2277923两组间有统计学意义（P<0.05)，rs3729753两组间无统计学意义（P>0.05）；各位点在不同疾病间（冠心病、原发性高血压、先心病、冠心病合并原高）并未发现差异rs1801131（χ2=5.799，P=0.122）、rs1801133（χ2=4.221，P=0.239）、rs2277923（χ2=1.154，P=0.562）；单因素方差分析显示在rs1801133位点基因型CC、CT、TT中Hcy血清水平为（F=17.231，P=0.000）差异有统计学意义，在rs1801131位点基因型AA、AC、CC中Hcy血清水平为（F=6.900，P=0.001）差异有统计学意义，并且从野生纯合子到突变杂合子、突变纯合子逐渐升高；对14个心血管疾病可能的危险因素进行Logistic回归分析，关联程度用OR值及95%CI表示，筛出9个相关因素：TG、TC、HDL-C、LDL-C、LP（a）、Hcy、rs1801131、rs1801133、rs2277923；经线性相关性分析，用Pearson相关系数（r）来描述相关性，Hcy与HDL呈负相关（r=-0.217，P=0.005）、Hcy与LP（a）呈正相关（r=0.192，P=0.015）；ROC受试者工作曲线中Hcy的曲线下面积最大为0.950，它对疾病的诊断价值最大。　　结论：循证医学结果显示MTHFR C677T基因多态性与心血管疾病的发病具有显著相关性，突变等位基因T显著增加了心血管疾病的风险。MTHFR基因rs1801131位点C等位基因（AC、CC基因型）、rs1801133位点T等位基因（CT、TT基因型）、NKX2.5基因rs2277923位点A等位基因（GA、AA基因型）与心血管疾病风险相关，它们既可作为疾病的风险因子预测疾病、也可评估疾病的严重程度及进程。MTHFR基因rs1801131位点AC、CC基因型及rs1801133位点CT、TT基因型与高Hcy血清水平相关，Hcy可作为有效辅助因子诊断心血管疾病。rs1801131、rs1801133、rs2277923基因组合型突变比单个基因突变更容易致病，对疾病的发生具有联合作用。

目录

声明

英文缩略词表

0 引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 数据处理及统计学分析

2 结 果

2.1文献检索结果

2.2纳入研究的基本特征

2.3纳入研究的文献质量评价结果

2.4 Meta 分析结果

2.6发表偏倚评估

2.7 循证医学与实验的联系

2.8 正常对照组与心血管疾病组两组同型半胱氨酸及一般临床基线资料比较

2.10 MTHFR基因rs1801131、rs1801133位点，NKX2.5基因rs3729753、rs2277923位点PCR扩增结果及电泳图

2.11 MTHFR基因rs1801131、rs1801133位点，NKX2.5基因rs3729753、rs2277923位点基因分型测序图

2.12 MTHFR rs1801131、rs1801133位点，NKX2.5 rs3729753、rs2277923位点基因分析结果

2.13 基因亚组分析

2.14 基因型组合分析

2.15 心血管疾病的二元Logistic回归分析

2.16 MTHFR基因rs1801131 、rs1801133位点不同基因型血清Hcy水平单因素方差分析及组间比较

2.17 Hcy与TG、TC、HDL、LDL、LP（a）的相关性分析

2.18 TG、TC、HDL、LDL、LP（a）、Hcy 对心血管疾病的诊断

3.1 MTHFR基因C677T（rs1801133）多态性与心血管疾病相关性的系统评价和Meta分析

3.2 MTHFR基因rs1801131、rs1801133和NKX2.5基因rs3729753、rs2277923多态性位点与成人心血管疾病和小儿先心病遗传易感性的相关性分析

3.3 MTHFR基因与Hcy水平的相关性以及危险因子在心血管疾病的作用机制及临床诊断价值研究

4 结 论

参考文献

综述：基因多态性与心血管疾病相关性的研究进展

作者简历

致谢

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