纳米转运系统介导microRNA靶向沉默HIF-1α和Survivin对鼻咽癌细胞增殖及放疗敏感性的影响

摘要

目的：　　通过运用纳米颗粒作为基因转染载体，将靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和生存素（Survivin）的小RNA（micro RNA）导入鼻咽癌CNEII细胞，以期从基因放射增敏的角度来阻断肿瘤细胞的生长，从而为鼻咽癌的特异放射增敏基因治疗的研究开辟一条新途径及在其过程中载体的选择提供一个新的研究思路，为今后进行系列基因放射增敏研究奠定良好的基础。　　方法:　　设计合成靶向HIF-1α及Survivin的microRNA干扰质粒，制备聚乙烯亚胺-四氧化三铁（PEI-Fe3O4）磁性纳米粒并用电子显微镜观察其大小及表面形态特征；转染包被miRNA-HIF-1α质粒和miRNA-Survivin质粒的PEI-Fe3O4磁性纳米粒到CNEII细胞中；在荧光显微镜下观察各组转染效率；利用RealTime RT-PCR检测HIF-1α及Survivin基因mRNA表达抑制情况；利用Western blot检测HIF-1α和Survivin的蛋白表达抑制情况；MTT法检测干扰质粒对鼻咽癌CNEII细胞增殖的影响；使用流式细胞仪检测转染干扰质粒后CNEII细胞的凋亡情况。　　结果：　　成功制备PEI-Fe3O4磁性纳米粒。H组、S组、HS组转染CNEII细胞的转染率分别为55.3％±6.5%、48.1%±2.3%、46.6%±4.1%。HIF-1α基因的mRNA沉默效率H组为69%，HS组为84%，蛋白抑制率H组为69.4%，HS组为73.3%；Survivin基因的mRNA沉默效率S组为97%，HS组为93%,蛋白抑制率S组为82.5%，HS组为65%。转染后S组、HS组与NC组相比，凋亡平均增加1.97倍、1.46倍；经放射线照射后，H组、S组、HS组凋亡率相比于NC组分别平均增加4.00倍、3.40倍、3.67倍，H组、S组、HS组与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）,而上述结果中双基因HS组较H组及S组差异无统计学意义（ P>0.05）。　　结论：　　成功转染包被miRNA-HIF-1α质粒和miRNA-Survivin质粒的PEI-Fe3O4磁性纳米粒到鼻咽癌CNEII细胞中，且在mRNA分子水平及蛋白水平均能沉默靶基因，沉默靶基因后的鼻咽癌细胞增殖抑制，凋亡增加，施以放射线照射后凋亡增加更为明显。

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英文缩略词表

0 引 言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结 果

2.1 纳米载体的表征

2.2 转染效率

2.3 Real Time RT-PCR检测靶基因沉默效果

2.4 Western Blot检测靶基因蛋白沉默效果

2.5 MTT法测各干扰质粒对细胞增殖的影响

2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡情况

2.7 细胞经放射线照射后检测细胞凋亡情况

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述：纳米包被siRNA复合体-一种新型癌症治疗方案

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