甲状旁腺激素促进下颌骨牵张成骨过程中OPG/RANKL信号通路关键信号分子表达研究

摘要

目的：　　通过检测甲状旁腺激素（parathyroid hormone,PTH）调控牵张成骨过程中不同时期OPG/RANKL信号通路中关键分子表达，探索PTH促进牵张成骨的机制。　　方法：　　选用SPF级新西兰大耳白兔27只，建立下颌骨牵张成骨实验动物模型。将实验动物随机分为实验A组、实验B组及对照组，实验A组在牵张期隔日皮下注射PTH40μg/Kg，实验B组给予PTH20μg/Kg，对照组给予生理盐水1ml。牵张期结束后当天、第7天、第14天处死动物，做新骨HE染色分析成骨质量，免疫组织化学法研究新骨中OPG、RANKL、TRAF6的表达强度。实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测牵张新骨中OPG、RANKL、c-fos和TRAF6 mRNA的表达量。　　结果：　　1、HE染色结果显示实验组下颌骨牵张新骨质量优于对照组。　　2、免疫组织化学结果显示OPG在各时期实验B组表达高于实验A组和对照组；RANKL、TRAF6在各时期实验B组表达低于实验A组和对照组。　　3、qPCR检测显示，在各固定时期两实验组OPG mRNA的表达量均高于对照组（P<0.05）；TRAF6 mRNA和c-fos mRNA的表达量低于对照组（P<0.05）；在固定0天、固定14天时实验组RANKL mRNA的表达量低对照组（P<0.05）,而在固定7天时三组表达差异没有统计学意义。　　结论：　　1、PTH可以促进牵张区的早期成骨，缩短牵张成骨的治疗周期。　　2、PTH在牵张成骨中可以上调OPG的表达，下调RANKL的表达，导致下游因子TRAF6、c-fos的表达降低，可能通过OPG/RANKL通路调节成骨与破骨的关系，从而促进成骨。　　3、PTH促进牵张成骨存在剂量效应关系，间隙性较大剂量应用甲状旁腺激素更有利于成骨，但最适剂量仍需进一步研究。

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引言

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1实验动物

1.1.2 植入器械

1.1.3设备

1.1.4 试剂

1.2方法

1.2.1 实验分组

1.2.2手术建立兔下颌骨牵张成骨模型

1.2.3 标本获取和处理

1.2.4新生骨组织苏木素-伊红（HE）染色

1.2.5免疫组织化学SP法检测OPG RANKL TRAF6表达

1.2.6 qPCR检测下颌骨牵张新骨中OPG、RANKL、c-fos、TRAF6 mRNA的表达量

2.4.2逆转录合成cDNA

2结果

2.1 HE染色结果分析

2.2免疫组织化学染色

2.2.1 OPG免疫组织化学染色

2.2.2 RANKL免疫组织化学染色

2.2.3 TRAF6免疫组织化学染色

2.3实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）测定各时期实验组与对照组新生骨中OPG、RANKL、c-fos、TRAF6的m RNA相对表达量

2.3.1 OPG mRNA

2.3.2 RANKL mRNA

2.3.3 TRAF6 mRNA

2.3.4 c-fos mRNA

3 讨论

4、结论

参考文献

综述：PTH(1-34)调控兔下颌骨牵张成骨中OPG/RANKL信号表达研究

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