大鼠成骨细胞膜片在不同钛表面的骨再生效应研究

摘要

目的：　　初步探讨大鼠成骨细胞膜片在不同钛表面的骨再生效应。　　方法：　　原代培养大鼠成骨细胞，通过形态学、HE染色、碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定成骨细胞；在不同表面处理的钛片上构建大鼠成骨细胞膜片，实验分组：喷砂酸蚀组、阳极氧化组和光滑组，分别于第一周和第二周，采用物理刮取法获取成骨细胞膜片；通过倒置相差显微镜、扫描电镜对细胞膜片进行观察；HE染色测量细胞膜片的厚度；MTT法测量细胞膜片的细胞密度；微量酶标法检测细胞膜片碱性磷酸酶（ALP）活性；采用实时荧光定量PCR检测成骨细胞膜片Runx相关转录因子-2（Runx2）mRNA、骨涎蛋白（BSP）mRNA的表达，并对数据进行相应的统计分析。　　结果：　　倒置相差显微镜下观察原代培养细胞，细胞符合成骨细胞形态学特征，HE染色、碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定结果符合成骨细胞特性。光滑组成骨细胞膜片的厚度测量：与第一周相比，第二周细胞膜片厚度明显增加（P<0.05），提示细胞膜片在钛表面增殖生长。MTT法检测：喷砂酸蚀组和阳极氧化组的细胞增殖率明显高于光滑组，细胞增殖率随时间增加而上调；喷砂-酸蚀组与阳极氧化组之间无差异。碱性磷酸酶（ALP）检测：各时间点喷砂酸蚀组和阳极氧化组碱性磷酸酶活性明显高于光滑组（P<0.05）；各组第二周较第一周碱性磷酸酶活性降低(P<0.05)；喷砂酸蚀组与阳极氧化组间无明显差异。实时荧光定量PCR检测：组间比较时，相对于光滑组，阳极氧化组Runx2 mRNA的表达量明显上调(第一周、第二周P<0.05),喷砂酸蚀组Runx2 mRNA的表达量比光滑组增加最明显（第一周P<0.05，第二周P<0.05）。第一周和第二周喷砂酸蚀组和阳极氧化组BSP mRNA表达量均高于光滑组,两周均具有统计学意义，其中第二周喷砂酸蚀组BSP mRNA表达量比光滑组显著增加（P<0.05）。喷砂酸蚀组与阳极氧化组间无差异。组内比较时，各组细胞膜片第二周Runx2 mRNA的表达量比第一周明显下调（P<0.05）；与第一周比较，第二周BSP mRNA的表达量明显上调（P<0.05）。　　结论：　　成骨细胞膜片在不同处理钛表面的成骨能力有差异。在本研究条件下，与光滑钛表面相比，喷砂酸蚀和阳极氧化处理钛表面的成骨细胞膜片表现出更强的黏附、增殖、分化和矿化能力，而两者间未见明显差异,其相关机制有待进一步的研究。

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英文缩略词表

0 引 言

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 统计学分析

2 结果

2.1钛表面形态观察及化学组分分析

2.2成骨细胞培养及鉴定

2.3成骨细胞膜片的观测

3 讨论

4结论

参考文献

综述：细胞膜片技术及应用于骨组织工程的研究进展

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致谢

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