驱动蛋白家族成员2C(KIF2C)基因对肝癌细胞株SMMC--7721生物学行为影响的研究

摘要

本文主要从以下几方面展开论述：　　第一部分　　目的:探讨KIF2C基因对原发性肝细胞癌患者预后的影响　　方法:首先我们通过从高通量表达数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中根据入组标准(1)原发性肝细胞癌，(2)拥有完整的生存资料，(3)拥有完整的基因表达量数据。筛选得到GSE14520数据集，该数据集更新至2017年4月5日，并于2017年12月15日通过验证。下载数据并从中获得原发性肝细胞癌的基因表达数据集，从中筛选得到KIF2C的基因表达量，进行数据处理，将一般临床资料进行单因素分析，并将有统计学差异的指标(P＜0.05)纳入多因素分析。同时使用Kaplan-Meier方法绘制生存分析曲线图，探讨KIF2C的表达量与乙肝相关性原发性肝细胞癌患者的预后关系。而后我们通过The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库搜索原发性肝细胞癌患者的临床信息和基因表达谱，下载数据并根据相同的入组标准筛选得到370例原发性肝癌患者的资料与基因表达谱，进行单因素并将有统计学差异的指标(P＜0.05)纳入多因素分析。同时使用Kaplan-Meier方法绘制生存分析曲线图。　　结果:GEO数据的多因素分析结果显示KIF2C表达量与患者预后相关(P=0.009，HR(95％CI)=1.816(1.159-2.844))，Kaplan-Meier生存分析显示KIF2C高表达患者的预后较差(P=0.0119)。TCGA数据的多因素分析结果显示KIF2C表达量与患者预后相关(P=0.001，HR(95％CI)=1.949(1.324-2.869))，Kaplan-Meier生存分析显示KIF2C高表达患者的预后较差(P＜0.0001)。　　结论:KIF2C表达量的高低对于原发性肝细胞癌患者的预后具有一定的影响，高表达的患者预后较差。可能为原发性肝细胞癌的靶向治疗提供新的思路。　　第二部分　　目的:通过体外细胞功能实验探讨KIF2C基因对肝癌细胞株SMMC—7721的生物学行为影响。　　方法:我们通过实时荧光定量PCR检测KIF2C在各肝癌细胞株中的表达量，挑选合适的细胞株进行后续研究。再通过慢病毒介导技术转染SMMC-7721细胞株，构建KIF2C基因沉默、过表达稳定转染细胞株，并通过蛋白印迹技术检测SSMC-7721细胞株中KIF2C基因沉默及过表达效率。进行KIF2C稳定转染细胞株的体外功能试验，包括细胞增殖实验，迁移实验，细胞平板克隆形成，侵袭实验实验等，观察KIF2C基因对SMMC-7721肝癌细胞株生物学行为的影响。　　结果:细胞增殖实验中，细胞在重新接种并培养至24小时(P=0.004)、48小时(P＜0.001)、72小时(P＜0.001)，四组细胞数目的组间有统计学差异，SMMC-7721、SMMC-7721-kif2c-过表达细胞数目均显著高于SMMC-7721-kif2c-沉默细胞(P=0.011，P=0.035)。　　细胞平板克隆形成实验中SMMC-7721-kif2c-过表达细胞的克隆形成率明显高于SMMC-7721、SMMC-7721-NC和SMMC-7721-kif2c-沉默细胞。　　细胞划痕实验中SMMC-7721-kif2c-过表达细胞在0-24h内和24-48h时间段内的平均迁移距离均显著高于SMMC-7721-kif2c-沉默细胞(P=0.044，P=0.016)。　　细胞侵袭实验中SMMC-7721-kif2c-过表达细胞穿越基质膜的细胞数显著高于SMMC-7721、SMMC-7721-NC和SMMC-7721-kif2c-沉默细胞(P=0.022, P=0.002, P＜0.001)。　　结论:KIF2C基因能够促进肝癌细胞株SMMC-7721的增殖，迁移侵袭，克隆成形能力。

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个人简历

摘要

前言

参考文献

第一部分 KIF2C基因对原发性肝细胞癌患者预后的影响

1．资料和方法

2．结果

3．讨论

4．结论

参考文献

第二部分 KIF2C基因对SMMC-7721肝癌细胞株体外生物学行为影响的初步验证

1．材料和方法

2．实验原理和步骤

3．结果

4讨论

5．结论

参考文献

全文总结

附录

综述

致谢