锰中毒性帕金森综合征环状RNA表达谱及其调控机制的探讨

摘要

目的：锰中毒性帕金森综合征是锰中毒后诱发的严重的、不可逆性锥体外系运动功能障碍，临床表现类似帕金森病的表现，一旦确诊，患者的锥体外系损害已无法逆转，严重地影响了患者的生命质量，且目前尚无特效的治疗方法，因此深入了解锰中毒性帕金森综合征的发病机制，以协助在早期锰接触的患者中识别出锰中毒性帕金森综合征的高危患者，并为治疗提供新的治疗靶点，具有重要的意义。环状RNA(circRNA)是一种稳定、多样、保守的新型非编码RNA，参与人类基因的调控，与疾病的发生和发展有关。本研究目的在于了解锰中毒性帕金森综合征有无特异性的circRNA表达谱，并初步探讨其在锰中毒性帕金森综合征中可能存在的作用，为锰中毒性帕金森综合征的诊断和治疗提供新的靶点。目前国内外尚无锰中毒性帕金森综合征circRNA的相关研究。　　材料与方法：自2017年3月至2018年10月于广西工人医院和广西医科大学第一附属医院住院部和门诊分别收集符合纳入标准的患者，根据临床评估分为锰中毒性帕金森综合征组（A组）、锰接触不发病组（B组）、帕金森病组（D组）、正常对照组（C组），分别提取血浆circRNA进行circRNA芯片检测，并筛选出差异表达的circRNA，对表达差异的circRNA结合生物信息学方法分析探讨其功能。并通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)进一步验证其表达水平。　　结果：通过circRNA芯片检测每个样本测得13617个Raw Data，经过筛选后各实验组相对正常对照组共分别得到10145个circRNAs存在差异性表达。进一步筛选后，结果提示锰中毒性帕金森综合征组和正常对照组有21个circRNAs表达存在显著性差异，锰接触不发病组和正常对照组有194个circRNAs表达存在显著性差异，帕金森组与正常对照组有139个环状RNAs表达存在显著性差异。为了评价circRNA在生物学过程、细胞成分、分子功能以及通路中的属性，利用生物信息学分析，我们对circRNA的同源性基因(circRNA gene symbol)进行GO分析和pathway分析，以推测circRNA在锰中毒性帕金森综合征中的潜在功能，本研究结果显示，在锰中毒性帕金森综合征中有显著差异性表达的circRNA gene symbols显著富集的GO条目中包括神经元的形成及生长发育、逆向转运、突触功能等，4个显著富集的信号通路分别为γ-氨基丁酸能突触、吗啡瘾、5-羟色胺能突触、逆行性内源性大麻素信号通路，这4条通路均与突触间神经递质传递有关，这预示circRNA可能通过作用于神经突触参与锰中毒性帕金森综合征的发生与发展。我们还使用了miRNA预测软件预测了可能与circRNA结合的潜在miRNA。另对circRNA芯片检测结果进行分析，可得出在锰中毒性帕金森综合征组有显著差异性表达，在锰接触不发病组或帕金森病组也有显著差异性表达的circRNA有21个，选取在各组间表达有明显梯度改变的5个circRNAs，这5个circRNAs分别为：hsa_circ_0000008、hsa_circ_0038416、hsa_circ_0054033、hsa_circ_0004738、hsa_circ_0001101，对这5个circRNA做进一步QRT-PCR定量验证。PCR结果显示，有4个circRNA与原样本表达一致，其中3个有统计学意义，分别为：hsa_circ_0000008、hsa_circ_0038416、hsa_circ_0004738。这3个circRNA在锰中毒性帕金森综合征组中存在显著表达差异(P=0.02、0.008、0.016，P＜0.05)，在锰接触不发病组中表达无统计学意义，hsa_circ_0000008在帕金森病组中存在显著差异性表达(P=0.015，P＜0.05)。　　结论：锰中毒性帕金森综合征存在特异的circRNA表达谱，为锰中毒性帕金森综合征的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。

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声明

个人简历

摘要

前言

材料和方法

1实验材料

2方法

3．1研究对象的基本情况及各项临床指标比较

3．2 circRNA芯片检结果测结果

3．3锰中毒性帕金森综合征相关circRNA的实验验证

讨论

结论

参考文献

综述 环状RNA在神经系统疾病中的研究进展

中英文缩略词表

致谢