不同浓度Il-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达的影响

摘要

目的:类风湿性关节炎作为一种骨关节相关的自身免疫性疾病，反复发作可导致关节内软骨和骨的破坏，骨骼肌萎缩，关节功能丧失，极易致残。目前其发病机制尚不明确。由于Th17细胞能够介导前炎症反应，抑制软骨基质的形成，诱导成骨细胞表达破骨细胞分化因子促进骨侵蚀;因而通过抑制Th17细胞的分化，可促进新的Treg细胞的生成，诱导免疫耐受，重新建立体内免疫稳态。本实验从Th17细胞因子的角度研究炎性细胞因子对破骨细胞功能的调节，分析其细胞损伤过程中细胞因子—破骨细胞的信号联系，进一步观察细胞因子阻断性抗体的作用，明确Th17细胞在细胞损伤作用机制。通过建立胶原诱导关节炎(CIA)小鼠模型，探讨不同浓度的IL-17A中和性抗体对CIA小鼠血清中炎症细胞因子表达。进一步观察细胞因子阻断性抗体的作用，明确Th17细胞在细胞因子—破骨细胞损伤作用机制。　　方法:将48只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为4组:A（空白对照）组、B（CIA+生理盐水）组、C（CIA+高浓度）组、D（CIA+低浓度）组，每组12只;将酸可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(chicken collagenⅡ，CCⅡ)溶于0.5 mol/L的醋酸溶液中，使用匀浆器充分乳化于4℃搅拌过夜，使CCⅡ充分溶解，然后加入等体积的氟氏完全佐剂(CFA)将其充分混匀乳化配成浓度为2.0mg/mL的乳剂，按每只小鼠0.1mL乳剂于尾部皮内多点免疫，初次免疫2周后以同样方法加强免疫，诱导CIA小鼠模型出现后在小鼠腹腔注射细胞因子中和性抗体或生理盐水，观察2周并记录小鼠关节及关节外表现，检测血清TNF-a、IL-17、IL-6表达水平。采用SPSS18.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（(x)±s）表示;采用One-wayANOVA分析和t检验;P＜0.05表示差异有统计学意义。　　结果:C57BL/6雄性小鼠给药48小时后尾部注射部位出现多个炎性小溃疡，红肿明显，逐渐加重并破溃，破溃处结痂，而溃疡愈合后脱落。初次免疫21天后开始发病，出现后足关节红肿，肤温升高，毛发失去色泽，神志倦怠，然后蔓延到踝关节和前足，逐渐加重，表现为多发性、对称性关节肿胀变红，部分小鼠关节强直、畸形，活动受限。A组随饲养时间延长，体重逐渐加重。模型组体重增加明显小于正常组。C、D与B比较TNF-a、IL-17、IL-6表达水平显著降低，并且IL-17A中和性抗体高浓度组较低浓度组血清中炎症细胞因子表达水平降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　结论:通过CIA小鼠腹腔内注射IL-17A中和抗体，结果发现IL-17A中和抗体治疗组小鼠的足肿胀程度及功能障碍减轻，并且关节炎平均指数评分改善，另外关节肿胀程度与足垫厚度呈正相关性，与小鼠体重变化呈负相关性。IL-17A中和性抗体可显著降低CIA小鼠模型血清中炎症细胞因子TNF-a、IL-17、IL-6表达水平，且以高浓度组较低浓度组改善骨关节功能更显著，其作用机制是通过调节Th17细胞参与介导的细胞因子损伤免疫机制，抑制炎症细胞因子表达来实现。

目录

声明

摘要

引言

正文

1 实验材料和方法

1．1 实验动物

1．2 主要试剂

1．3 实验仪器

1．3 小鼠关节的制备

1．4 观察指标

1．5 统计学方法

2 结果

2．1 建立小鼠模型的基本情况

2．3 CIA小鼠平均关节炎指数(MAI)(图3)

2．4 实验各组小鼠爪厚度变化

2．5 CIA小鼠治疗2周血清TNF-α、IL-17、IL-6水平的比较

3 讨论

3．1 现代医学对类风湿性关节炎的病因认识

3．2 RA发病机理分子水平的研究

3．3 常用的动物造模方法

3．4 常用的检测指标

3．5 对类风湿性关节炎靶向治疗的认识

3．6 生物治疗的进展

3．7 靶向作用机制

3．8 靶向治疗药物的安全性

3．9 靶向细胞因子的生物制剂

4 中医对类风湿性关节炎的认识

4．1 “扶正祛邪”法是切合类风湿性关节炎病因病机的治疗方法

5 存在的问题及展望

5．1 存在的问题

5．2 展望

结论

参考文献

缩略词表

综述

致谢

个人简历及攻读学位期间获得的科研成果