夜香树提取物Nocturnoside B体内外抗肝癌作用及机制研究

摘要

目的:探讨夜香树提取物Nocturnoside B体外对人肝癌细胞BEL-7404以及体内对人肝癌细胞BEL-7404荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用及其机制。　　方法:（1）用MTT检测不同浓度的Nocturnoside B对人肝癌细胞BEL-7404的增值的影响，观察细胞生长状态和形态学，平板集落形成试验检测Nocturnoside B对细胞集落形成的影响，Hoechst染色，检测Caspase3酶活性，用流式细胞仪（FCM）PI染色检测细胞周期变化，单细胞凝胶电泳检测药物对肿瘤BEL-7404细胞DNA的损伤，瑞氏染色。（2）选用人肝癌细胞BEL-7404建立荷瘤裸鼠，肿瘤长到0.2～0.4 cm后将荷瘤裸鼠随机分为5组，生理盐水组、顺铂组和Nocturnoside B高﹑中﹑低组,剂量分别为6、4、2mg/kg。治疗期间测量皮下移植瘤的长径和短径；20d后眼眶取血并处死裸鼠，取瘤块制成蜡块，进行常规病理切片；酶联免疫吸附法测定裸鼠血清中 I L-8浓度，采用常规HE染色、免疫组化DAB染色观察瘤组织微血管密度的形成与血管内皮生长因子，增值细胞核抗原（PCNA）和Ki-67。　　结果:（1）MTT结果显示，Nocturnoside B对人肝癌细胞BEL-7404的增殖具有显著的抑制作用，并呈浓度和时间依赖性关系。其48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为15.92μg/ml和8.86μg/ml。顺铂组的增殖亦存在抑制作用； Nocturnoside B处理后的 BEL-7404细胞失去正常结构，形态变圆，体积缩小，有部分细胞的染色质浓缩，细胞核碎裂形成典型的凋亡小体。随着药物浓度的增大及作用时间的延长，活细胞数量明显减少，培养基中可见大量细胞碎片；平板细胞集落形成受到抑制；Hoechst染色后有的细胞核呈致密浓染，碎块状致密浓染，颜色有些发白发亮；检测到Caspase3酶活性明显增加；PI法检测到G0/G1和G2/M期细胞数增，S期减少；单细胞凝胶电泳检测到“彗星”细胞出现的频率升高，“彗星”尾长度增加且形状变大。（2）Nocturnoside B高、中、低剂量组肝癌裸鼠肿瘤的相对增值率为38.86％、42.94％、48.26％。镜下发现， Nocturnoside B高剂量组部分肿瘤细胞体积变小，细胞核浓染，肿瘤组织坏死严重。与生理盐水组相比较，Nocturnoside B高剂量组能明显降低血清中白细胞介素-8的含量(P<0.01)；降低裸鼠肿瘤组织中微血管密度和血管内皮生长因子的含量(P<0.05)；裸鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原PCNA和Ki-67的含量也明显下降(P<0.05)。　　结论:（1）Nocturnoside B在体外能够显著抑制人肝癌细胞BEL-7404，阻滞肿瘤细胞的G2/M期，剂量依赖性地引起BEL-7404细胞DNA双链断裂，对DNA造成损伤，诱导 BEL-7404细胞凋亡。（2）Nocturnoside B对人肝癌BEL-7404细胞裸鼠皮下移植瘤的生长具有显著的抑制作用，可能通过降低血清中白细胞介素-8、微血管密度和血管内皮生长因子、增殖细胞核抗原PCNA和Ki-67，最终抑制肿瘤的生长。

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第一部分 夜香树提取物Nocturnoside B对人肝癌细胞株BEL-7404体外抗肿瘤作用的研究

1 材料

2 方法

3. 统计学处理

4.结果

5 讨论

第二部分 夜香树提取物Nocturnoside B抗人肝癌细胞株BEL-7404体内裸鼠移植瘤实验研究

1 材料

2 方法

3 统计学处理

4 结果

5 讨论

结论

参考文献

问 题 与 展 望

综述

致谢

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