芒果苷对哮喘小鼠CD4+T细胞亚群及其细胞因子影响的实验研究

摘要

目的：运用卵白蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立过敏性哮喘小鼠模型，观察芒果叶提取物——芒果苷治疗过敏性哮喘的药效作用，并进一步探讨芒果苷对哮喘小鼠CD+4 T细胞亚群及其细胞因子的影响。　　方法：将60只4~5周SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为6组：空白对照组、模型对照组、地塞米松阳性对照组（1.25mg·kg-1）、芒果苷高剂量组（400mg·kg-1）、芒果苷中剂量组（200mg·kg-1）和芒果苷低剂量组（100mg·kg-1），每组10只。采用OVA致敏和激发构建小鼠哮喘模型。　　1芒果苷治疗过敏性哮喘的药效学研究：观察激发时各组小鼠的哮喘发作表现；细胞涂片进行外周血中白细胞分类计数；HE染色观察肺组织病理切片炎症细胞浸润情况，确认成功的复制哮喘动物模型。　　2芒果苷治疗过敏性哮喘的免疫机制研究：采用蛋白芯片技术检测小鼠血清中相关炎症细胞因子的蛋白表达水平；采用利用 FACS技术检测哮喘小鼠T细胞中CD4+IFN-γ+细胞、 CD4+IL-4+细胞、CD4+IL-17+细胞、CD4+Foxp3+细胞占CD4+T细胞的比例的变化，以进一步明确芒果苷对Th1、Th2、Thl7和Treg细胞分化的调节作用。　　结果：1芒果苷治疗过敏性哮喘的药效学研究：与模型组比较，各芒果苷治疗组小鼠哮喘发作表现如呛咳、呼吸急促、躁动不安、腹肌收缩、紫绀等症状明显减轻（P<0.05~0.01）；芒果苷各剂量组均能明显减少外周血中嗜酸性粒细胞（EOS）、嗜中性粒细胞（NEU）比例（P<0.01），芒果苷中、低剂量组能减少外周血中白细胞总数（P<0.01）；芒果苷各剂量组均可不同程度的改善肺组织的病理学改变，减轻气道炎症（P<0.05~0.01）。　　2芒果苷治疗过敏性哮喘的免疫分子机制研究　　2.1芒果苷对哮喘小鼠血清中相关细胞因子蛋白水平影响：蛋白芯片结果显示：与模型组相比，芒果苷各剂量组均可显著提高小鼠血清中IFN-γ、IL-10的表达水平（P<0.05~0.01）；芒果苷高剂量组可明显降低IL-4、IL-17的表达水平（P<0.05~0.01）；芒果苷中剂量组可明显降低 IL-17的表达水平（P<0.01），对 IL-4的表达有降低趋势（P>0.05）；芒果苷低剂量组对IL-17有降低趋势（P>0.05）。　　2.2芒果苷对CD+4 T细胞亚群及细胞因子分化和功能的影响：流式细胞仪检测结果显示：与模型组相比，芒果苷高剂量组可显著降低小鼠脾细胞中CD4+IL-4+、CD4+IL-l7+细胞占CD4+细胞的比例（P<0.05）；芒果苷中剂量组对CD4+IL-4+、CD4+IL-l7+细胞占CD4+细胞的比例有降低的趋势；芒果苷高、中剂量组对 CD4+IFN-γ+细胞/ CD4+细胞有增加的趋势（P>0.05）；芒果苷低剂量组 CD4+IFN-γ+细胞/ CD4+细胞有所增加（P<0.05），对CD4+Foxp3+细胞/CD4+细胞有增加趋势（P>0.05）。　　结论：1芒果苷可明显减轻激发时哮喘小鼠的发作表现，改善肺组织病理学改变，减轻气道炎症，进一步证实了芒果苷具有平喘的药效作用,并成功复制哮喘模型。　　2芒果苷治疗过敏性哮喘的免疫机制可能是：①调节Th1、Th2、Treg和Th17细胞的细胞因子的表达：即可上调Th1型细胞因子IFN-γ和Treg型细胞因子IL-10的表达，抑制Th2型细胞因子IL-4和Th17型细胞因子IL-17的表达；②调节Th1、Th2、Treg和Th17细胞的分化：即上调Th1型细胞占CD4+细胞比例和降低Th17型细胞、Th2型细胞占CD4+细胞比例，对Treg型细胞占CD4+细胞比例有上调的趋势。

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引言

主要技术路线：

正文

一、芒果苷治疗过敏性哮喘的药效学研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

二、芒果苷对哮喘小鼠CD4+亚群分化调节的影响研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

三、芒果苷对哮喘小鼠血清中相关细胞因子表达水平的影响研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

讨论

1 中医对支气管哮喘的认识

2 芒果苷治疗过敏性哮喘的药效学研究

3 芒果苷治疗过敏性哮喘的免疫分子机制研究

结论

存在的问题与展望

参考文献

附录

综述

致谢

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