广西蛤蚧对缓解期哮喘小鼠作用机理的研究

摘要

目的：通过药理动物实验，从气道炎症及免疫失衡方面初步探讨广西蛤蚧治疗哮喘缓解期的作用机制，为临床应用提供实验依据。　　方法：取健康清洁级昆明种小鼠72只，体重（18±2）g，雌雄各半，随机分组，每组12只。分组如下：A组（空白组），B组（模型组），C组（地塞米松组），D组（蛤蚧高剂量组），E组（蛤蚧中剂量组），F组（蛤蚧低剂量组）。B、C、D、E、F组建立哮喘模型。除A组外，其余各组小鼠于第1、7、14天采用腹腔注射抗原液致敏，第15天起，B、C、D、E、F组以引喘液雾化激发，连续7d。在每次雾化激发30min之后，D、E、F组给予不同剂量的广西蛤蚧灌胃（ig）（剂量分别为1.536、0.768、0.384g生药/kg），C组给予地塞米松（3mg/kg），A、B组给予等体积蒸馏水，均按20mL/kg体重ig给药。观察各组小鼠引喘潜伏期、外周血及肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞的数量；各组小鼠肺组织切片做HE染色，光镜下观察支气管肺组织病理形态改变情况；ELISA方法检测各组小鼠血清中IgE、IL-4、IFN-γ的含量及各组小鼠血浆中PAF的表达。　　结果：1.一般状态：激发时，小鼠出现躁动不安，搔抓颜面皮毛等过敏症状，呼吸急促，腹式呼吸明显，口鼻、四肢及尾尖轻度紫绀，拉软便；造模后，小鼠逐渐出现精神不振，反应迟钝，毛色失去光泽。各给药组亦出现呼吸急促，幅度增强等表现，但与模型组相比较轻。2.引喘潜伏期：模型组小鼠的引喘潜伏期缩短，与空白组比较，有极显著性差异（P<0.01）。高、中、低剂量组小鼠引喘潜伏期延长，与模型组比较，有极显著性差异（P<0.01）。3.外周血及肺泡灌洗液（BALF）中EOS计数：模型组外周血及BALF中EOS百分比值均明显升高，与空白组比较，有极显著性差异（P<0.01）。地塞米松组及高、中、低剂量组均明显降低，与模型组比较，有极显著性差异（P<0.01）。4.血清IgE含量：模型组小鼠血清IgE含量升高，与空白组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。高、中剂量组明显降低，与模型组比较，有明显差异（P<0.05）。低剂量组IgE含量降低，但与模型组比较，差异无统计学意义。5.血浆PAF含量：模型组小鼠血浆PAF含量升高，与空白组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。地塞米松组及高、中剂量组明显降低，与模型组比较，有明显差异（P<0.05）。低剂量组PAF含量降低，但与模型组比较，差异无统计学意义。6.血清IL-4/IFN-γ平衡：模型组小鼠血清IL-4含量升高，IFN-γ含量明显降低，与空白组比较，均有极显著性差异（P<0.01）。地塞米松组及高、中、低剂量组血清中 IL-4含量明显降低，与模型组比较，有极显著性差异（P<0.01）；IFN-γ含量明显升高，与模型组比较，均有极显著性差异（P<0.01）。模型组IL-4/IFN-γ明显升高，与空白组比较（P<0.01）；地塞米松组及高、中、低剂量组IL-4/IFN-γ降低，与模型组比较，有极显著性差异（P<0.01）。7.肺组织病理改变：空白组肺组织结构完整，气道上皮细胞无损伤，周围组织无水肿；模型组的支气管肺组织呈炎症性改变；与模型组相比地塞米松组和蛤蚧高、中、低剂量组的炎症明显减轻。　　结论：1.广西蛤蚧可延长哮喘小鼠的引喘潜伏期。2.广西蛤蚧可降低哮喘小鼠外周血及BALF中EOS数量。3.广西蛤蚧可降低哮喘小鼠血清中IgE含量，血浆中PAF含量，有效调节血清IL-4/IFN-γ平衡。4.广西蛤蚧能明显改善哮喘小鼠的肺组织损伤。

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1 实验材料

1.1 实验动物

1.2 受试药物

1.3 实验药品及试剂

1.4 主要仪器设备

1.5 实验试剂配制

1.6 统计分析

2 实验方法