杨梅素在大鼠尿液中代谢产物的分析及其排泄情况研究

摘要

目的:建立杨梅素经大鼠口服给药后在大鼠尿液中代谢产物的LC-MS检测方法，并对其代谢产物的结构进行分析;建立杨梅素经大鼠口服给药后在尿液及粪便中杨梅素的含量测定方法，并应用于杨梅素大鼠体内排泄情况的研究;通过以上研究，为杨梅素的安全有效用药提供理论依据。　　 方法:(1)杨梅素大鼠体内代谢物测定采用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法，色谱条件:色谱柱:WatersSymmetryC18色谱柱(5μm，250mm×4.6mm);流动相:乙腈:0.1％磷酸，梯度洗脱;流速:1mL/min;检测器:紫外检测器（检测波长为375nm）;柱温:30℃;进样量:20μL;分析时间:35min。质谱条件:ESI源，喷雾电压:4KV;温度:350℃;扫描方式:负离子扫描;扫描范围:100-2000m/z。鞘气(He):1.2L/min;辅助气(N2):6L/min;毛细管电压:5V;管透镜补偿电压:-5V;采用二级全扫描质谱(FullScanMS2)。相对碰撞能:30％。根据各代谢产物的质谱检测结果及有关文献的记载，分析杨梅素的代谢物质，确定各代谢产物的结构。(2)采用反相高效液相色谱法测定了杨梅素经大鼠灌胃给药后48小时内不同时间段尿液中杨梅素原型药物的含量。色谱条件:色谱柱:WatersSymmetryC18色谱柱(5μm，250mm×4.6mm);柱温:30℃;流动相:乙腈:0.1％磷酸，梯度洗脱;流速:1mL/min;检测器:紫外检测器（检测波长为375nm）;进样量:20“L;分析时间:25min。(3)采用反相高效液相色谱法测定了杨梅素经大鼠灌胃给药后不同时间段在其粪便中杨梅素原型药物的含量。色谱条件:色谱柱:WatersSymmetryC18色谱柱(5μm，250mm×4.6mm);柱温:30℃;流动相:乙腈:1％冰乙酸，等度洗脱;流速:1mL/min;检测器:紫外检测器（检测波长为375nm）;进样量:20μL;分析时间:15min。　　 结果:(1)建立的高效液相-质谱联用法检测出杨梅素经大鼠灌胃给药后在其尿液中共有12个代谢产物，其中已确定结构的代谢产物7个，分别为黄酮类化合物常见的代谢产物如裂环产物3，5二羟基苯甲醛，杨梅素一甲基化产物和杨梅素二甲基化产物，脱羟基代谢产物等。(2)本研究建立的大鼠尿液中杨梅素原型药物的RP-HPLC含量测定方法，结果显示在大鼠尿液中，杨梅素在0.175～3.500μg/mL浓度范围内成良好的线性关系(r=0.998)。低、中、高浓度平均回收率分别为103.43％、109.86％、100.29％，RSD分别为5.77％、9.17％和5.85％。(3)本文建立的大鼠粪便中杨梅素原型药物的含量测定方法，结果表明杨梅素在0.20-10.00mg/g浓度范围内成良好的线性关系(r=0.999);低、中、高浓度平均回收率分别为90.77％、81.58％、93.09％，RSD分别为2.20％、2.28％、2.36％。　　 结论:本研究建立的杨梅素在大鼠尿液中代谢物质的LC-MS检测方法，可较好地对其代谢物质的结构进行分析，鉴定得到大鼠尿液中杨梅素的代谢物质主要有裂环产物如3，5二羟基苯甲醛，3，4-二羟基-5-甲氧基苯乙酸;杨梅素一甲基化产物和杨梅素二甲基化产物，脱羟基代谢产物。所建立的杨梅素在大鼠尿液及粪便的排泄物中杨梅素原型药物的含量测定方法，具有较强的针对性和准确性，可用于分析和监控杨梅素在大鼠体内的排泄情况。通过对杨梅素经大鼠灌胃给药后在不同时间段杨梅素原型药物在尿液及粪便中的含量测定结果进行分析，可见杨梅素在大鼠6-12小时尿液中含量最高，36-48小时尿液中含量极低;说明杨梅素6-12小时经尿液排泄的量最多，48小时时才几乎排泄完全;同时说明给药24小时后，仍有部分杨梅素存在于大鼠血液或组织中，48小时后才基本排泄完全。在其粪便中的排泄情况为0-12小时排泄量最大，24小时后排泄完全。其中，杨梅素经尿液排泄占给药量的0.16％，经粪便排泄占给药量的13.94％。

目录

摘要

引言

第一部分 大鼠尿液中杨梅素的代谢产物的LC／MS分析

1 实验材料

1．1 实验仪器及试剂

1．2 实验药品

1．3 实验动物

2 实验方法

2．1 样品的采集

2．2 供试品溶液的制备

2．3 色谱条件的选择

3 实验结果

3．1 样品的测定

3．2 杨梅素大鼠尿中代谢物质谱分析

4 讨论

第二部分 大鼠口服给药后尿液中杨梅素含量测定方法研究

1 实验材料

1．1 仪器与试剂

1．2 实验药品

1．3 实验动物

2 实验方法

2．1 供试品溶液的制备

2．2 对照品溶液的制备

2．3 色谱条件的选择

2．4 方法学考察

3 样品测定

3．1 尿液的采集

3．2 空白实验

3．3 大鼠尿液中杨梅素的测定

4 讨论

第三部分 大鼠粪便中杨梅素的含量测定方法研究

1 实验材料

1．1 仪器与试剂

1．2 实验药品

1．3 实验动物

2 实验方法

2．1 溶液的制备

2．2 色谱条件

2．3 方法学考察

2．4 样品测定

3 讨论

总结与展望

参考文献

综述 杨梅素研究进展

致谢

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