丹参注射液对SD大鼠非压迫性髓核突出神经根损伤的实验研究

摘要

目的：1.通过动物实验探讨折尾法持续牵张与椎间盘组织学改变的关系,为椎间盘退变模型的筛选提供一种较简便的实验模型。2.通过研究并探讨丹参注射液对神经根周围组织炎症介质的影响,来为临床中药活血化淤止痛法治疗腰腿痛提供理论依据，为进一步探索发掘预防及治退变椎间盘，提供新的思路和方法。　　方法：1.第一阶段：选用36只SD大鼠为研究对象，将其随机分为正常组12只、造模组24只。造模组内有又分：对照组12只和实验组12只。正常组不作特殊处理，其余造模动物组均使用自制捆绑带将鼠尾折成“U”型，在生理弯曲范围内，每日早晚2次，每次1-2小时。1个月后，每隔7天分批从正常组、对照组、实验组三组动物模型中各选取1只，用1％氯胺酮50mg/kg腹腔注射麻醉，将大鼠尾部消毒铺无菌巾，距鼠尾根部1cm处切断鼠尾并缝合伤口。同时，祛除鼠尾的皮肤及周围粘连的韧带等多余组织，再用生理盐水冲洗干净后，臵于4％中性福尔马林固定溶液中浸泡固定，并在4℃冰箱保存24 h后，用锋利的组织刀片切开尾部椎间盘，分别选取3-4个椎间盘组织做标本。然后，依次进行脱钙，酒精递度脱水，常规石蜡包埋，超薄切片机制备5μm组织切片，进行HE染色。光镜及电镜下组织学观察，用以确定椎间盘退变模型造模是否成功。2.第二阶段：在第一阶段确定椎间盘退变模型造模成功的基础上展开。剩余正常组不作特殊处理。分别给予对照组、实验组大鼠1%氯胺酮50mg/kg腹腔注射麻醉,将大鼠尾部和背部备皮、消毒、铺无菌巾,距尾根部1cm处切断鼠尾并缝合伤口。切开尾部椎间盘,取5个退变髓核并加入50ml生理盐水,充分搅拌成混悬液备用。将大鼠腰椎臵于屈曲侧卧位,以L4、L5棘突间隙为穿刺点,用9号腰椎穿刺针行硬膜外穿刺,成功后用微量注射器注射20ul大鼠自体髓核混悬液,接着将2%利多卡因30ul注射到硬膜外腔。麻醉恢复后,大鼠四肢活动自如,说明硬膜外穿刺和注射失败。双前肢活动自如,双后肢运动、感觉丧失或减退,20-30min后完全恢复,说明硬膜外穿刺注射成功。术后第二天给予药物干预：对照组给予0.9%生理盐水2ml灌胃处理；实验组给予丹参注射液2ml进行灌胃处理。从第7、14、21天分别从三组中随机抽取2只大鼠处死，取神经根周围组织两块，用滤纸吸取表面水份，准确称重后研磨成糜状。用生理盐水浸提前列腺素 E2,皂化后测定278nm处的吸光度,结果以OD值/g表示。　　结果：1.第一阶段：常规HE染色时，每个标本光镜下至少观察5个视野，纤维环外层组织嗜伊红，呈红色，内层组织嗜碱性，呈紫色；弹力纤维呈亮粉红色，胶原纤维被伊红染成淡粉红色，软骨细胞的细胞胞浆着色呈黑蓝色。正常组：镜下见椎间盘内的细胞均匀分布，形态正常。椎间盘纤维环完整、包绕髓核，其纤维成致密板层状排列，髓核居中(见图A，HE×100)。造模组的结构基本一致(见图B，HE×100)。镜下见：纤维环排列较杂乱，纤维肿胀或断裂，甚至可见微小裂隙，在断裂带出现了大量的白细胞以及大片状增生的胶原纤维，其中细胞增多；髓核细胞数量不断减少，髓核组织中有着少量髓核细胞，形态不规则，分布不均匀；纤维软骨组织增生，排列紊乱；少数可见有血管翳的生长。2.第二阶段：正常组：随着时间的改变，神经根周围组织中前列腺素E2水平无明显改变。对照组：造模后神经根局部前列腺素 E2水平明显增高，提示神经根周围发生了化学性炎症介质反应。随着时间的改变，于两周后达到最高值，后逐渐回落。实验组：造模后神经根局部前列腺素E2水平明显增高，提示神经根周围发生了化学性炎症介质反应。随着时间的改变，前列腺素E2水平逐渐下降，说明丹参有明显的抑制炎症介质的作用。　　结论：1.折尾法反复持续对SD大鼠鼠尾的牵张可引起椎间盘组织病理学的改变。2.丹参注射液对大鼠非压迫性髓核突出神经根周围前列腺素E2有明显的抑制作用。这与其有抑制致痛生化炎性因子的释放和保护神经元促进神经功能恢复等作用有关,需要进一步研究探讨。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

引言

正文

第一部分SD大鼠退变椎间盘组织病理学的研究

1 实验材料和方法

2 实验结果

3 讨论

4 存在的问题与展望

第二部分丹参注射液对SD大鼠非压迫性髓核突出神经根周围组织炎症介质的实验研究

1 实验材料和方法

2 实验结果

3 讨 论

4 存在的问题与展望

结论

参考文献

附图

综述

致谢

攻读学位期间发表的学术论文目录

声明

个 人 简 历