重组猪α干扰素对伪狂犬病毒攻毒保护作用和效果

摘要

干扰素（Interferon，IFN）是在一定干扰素诱导剂的诱导下，由细胞分泌产生的具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学活性的蛋白质。α干扰素（Interferon alpha , IFN-α）主要由单核一吞噬细胞产生，是天然免疫和获得性免疫的桥梁，可以激活NK细胞的细胞毒性并促进其增殖，调节机体免疫。它具有抗病毒作用，既可以与疫苗配合使用，增强免疫效果，也可以单独使用，提高动物的免疫机能，治疗猪病毒性疾病。本研究是在前期成功构建重组猪α干扰素酵母菌的基础上，对重组猪α干扰素的表达培养量进行放大，在50 L发酵罐进行培养，然后用5%的甘露醇作为冻干保护剂进行冻干，最后，将冻干的重组猪α干扰素进行安全性试验和对PRV的预防性试验。　　本试验中，我们将猪α干扰素基因修饰的重组酵母菌，接种于50 L的发酵罐内，选用BSM基础培养基和PTM1微量元素，选用优化的发酵条件：种子液的最佳培养时间为24 h，接种量为5%，诱导前发酵液的pH为5，温度为30℃，诱导开始调整pH至6.0，温度调节到28℃，发酵液的体积为一般不超过发酵罐体积的2/3为宜。大罐发酵所得的猪α干扰素，采用5%的甘露醇作为冻干保护剂进行冻干，以解决该制品热稳定性差、不易长期保存和远距离运输等问题。　　试验采用细胞病变抑制法在vero细胞单层上测定猪α干扰素抗病毒效价，用含100个TCID50 PRV攻毒后观察结果，结果表明，重组猪α干扰素抗PRV的活性为4.9×107 U/L。在（广东省）广东华农温氏连州分公司、（福建省）福建省漳州温氏农牧有限公司南靖畜牧分公司及（广西自治区）贺州广东温氏畜禽有限公司属下猪场进行基因工程猪α干扰素临床安全性试验，分别在哺乳仔猪、断奶仔猪、后备母猪、经产母猪及种公猪身上以推荐使用剂量、超剂量和推荐使用剂量重复注射试验猪，通过监测接种试验猪的精神状态、行为情况和采食饮水及生长性能，注射局部与全身反应等临床情况，考察该中试产品的安全性，试验结果显示所有猪只表现正常、呼吸正常、消化正常、饮水正常、无任何其他如跛行等不良反应。在实验室条件下，用重组猪α干扰素对猪伪狂犬病进行预防试验。将20头经ELISA鉴定为伪狂犬病阴性的30日龄断奶仔猪随机分为A、B、C、D 4个试验组，每组5只。A组为空白对照组，B组为干扰素对照组，C组为干扰素预防组，D组为病毒对照组。B、C组注射重组猪α干扰素20万 IU/头，A组注射等量生理盐水。3天后C、D组同时进行攻毒试验，并观察一周。攻毒后24 h，D攻毒组最先出现临床症状，5只猪攻毒后第2天体温均升高到40℃以上，随后出现发抖、震颤、咳嗽、拉稀等症状，发病率100%。攻毒后第5天C组干扰素预防组有3只猪体温升高。B组和C组均无明显临床症状。对猪只进行解剖可见，D组可见肺淤血、肝表面有坏死点、脑膜出血，病理切片结果同样显示A～C组无异样，D组有典型的肺脏、肾脏淤血、水肿和淋巴细胞增生。　　综上所诉，本试验在50 L发酵罐内成功表达重组猪α干扰素，并将发酵上清液全部冻干，放在2℃~8℃保存备用。在全国3个省份的4个猪场进行安全性试验，在实验室条件下对猪伪狂犬病进行了预防试验，证明该制品安全、无副作用，其对伪狂犬病有较为显著的预防作用，为重组猪α干扰素大规模生产并用于猪病毒性病预防奠定基础。

目录

第一个书签之前

致 谢