东莞市动物布鲁氏菌病流行病学调查及荧光免疫层析技术的应用

摘要

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起一种变态反应性人畜共患传染病。所有的哺乳动物都容易受到感染，但牛、羊、猪等家畜和野生动物最易感。布鲁氏菌是细胞内寄生菌，可以引起哺乳动物和人类的致病性和高度感染性，一般的抗生素难以治愈。临床上，家畜感染主要是流产、死胎、睾丸炎、不孕不育，关节炎为特征。人感染主要表现为人持续性感染、间歇性流感样症状，称作“波状热”，多汗、生殖系统疾病、关节炎、肝脾肿大以及肌肉-骨骼系统和中枢神经系统的并发症等。布鲁氏菌病对畜牧业造成严重的经济损失，对人类的健康和公共卫生安全构成严重的威胁。　　采用布鲁氏菌病虎红平板凝集试验方法，对2012~2016年采自东莞市的动物血清进行初筛，结果为阳性的样品进一步使用试管凝集试验进行检测，结果为共检测猪血清20221份，牛血清 275份，羊血清5024份，犬血清4508份，马血清329份，其中在猪血清中检出抗体阳性7份，牛血清中检出抗体2份，羊血清中检出抗体阳性4份，犬血清中检出抗体4份，马血清中未检出抗体阳性，猪、牛、羊、犬、马抗体阳性率分别为0.04%、0.73%、0.08%、0.09%和0。采用荧光PCR方法，对采自羊批发市场的300份羊阴道拭子和3份送检的可疑犬阴道拭子进行检测，检出布鲁氏菌阳性2份，并将结果阳性样品送广东省疾病预防控制中心进行细菌分离鉴定，分离出1株犬种布鲁氏菌和1株羊种布鲁氏菌。对东莞市疾病预防控制中心法定传染病疫情信息进行了人感染布鲁氏菌病的资料分析，2012年至2016年东莞市共有4例本土人感染布鲁氏菌病例，感染途径主要是接触牛、羊组织和饮用鲜羊奶。采用荧光免疫层析法分别对阳性血清和临床采集的样品进行检测，结果为荧光免疫层析法能够检出布鲁氏菌阳性血清阳性，而对O型口蹄疫、亚洲Ⅰ型口蹄疫、猪瘟阳性血清检测结果为阴性；能检出布鲁氏菌阳性血清（试管凝集效价1∶800）320倍的稀释度；检测1∶40稀释倍数的布鲁氏菌阳性血清的变异系数（C.V）为4.66%；检测临床样品60份，结果均为阴性。　　结果表明，东莞市猪、牛、羊、犬中存在布鲁氏菌病的感染，动物和动物产品存在布鲁氏菌污染的风险。同时，东莞市也是存在散发的人感染布鲁氏菌病例的风险。应用荧光免疫层析法检测布鲁氏菌病抗体，特异性强，结果稳定，灵敏度较高，操作简便、试验时间短，而且在结果判定上使用机器读数，与虎红平板凝集试验相比，结果更客观，更有利于正确判断布病的感染情况，该方法适合布病抗体检测的初筛。对于布鲁氏菌的防控，建议采取综合防控措施，加强对外来动物的监管，对动物和动物产品加强检疫，确保肉食品和动物产品的质量安全。

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1.1 概述

1.1.1 动物布鲁氏菌病临床症状

1.1.1.1 牛布鲁氏菌病

1.1.1.2 羊布鲁氏菌病

1.1.1.3 猪布鲁氏菌病

1.1.1.4 犬布鲁氏菌病

1.1.2 人感染布鲁氏菌病症状

1.1.3 布鲁氏菌病的危害

1.2 布鲁氏菌的病原特征

1.2.1 布鲁氏菌的分型

1.2.2 布鲁氏菌的生物学特点

1.2.3 布鲁氏菌的抗原

1.3 布鲁氏菌病疫苗

1.3.1 牛种布鲁氏菌A19菌株弱毒疫苗

1.3.2 羊种布鲁氏菌M5菌株弱毒疫苗

1.3.3 猪种布鲁氏菌S2菌株弱毒疫苗

1.4 布鲁氏菌的致病机理

1.5 布鲁氏菌的诊断技术

1.5.1 血清学检测方法

1.5.2 病原学检测方法

1.5.2.1 细菌分离、培养和鉴定

1.5.2.2 PCR方法

1.5.2.3 荧光 PCR方法

1.5.2.4 核酸探针技术

1.5.2.5 环介导等温扩增方法

1.6 布鲁氏菌病流行病学研究进展

1.6.1 世界布鲁氏菌病的流行情况

1.6.2 我国布鲁氏菌病流行情况

1.6.3 广东省布鲁氏菌病流行情况

1.7 研究目的与意义

2.1 材料

2.1.1 血清样品

2.1.2 羊和犬的阴道拭子

2.1.3 主要试剂

2.1.4 主要仪器

2.1.5 主要试剂配制

2.1.6 东莞市人感染布鲁氏菌资料

2.2 方法

2.2.2 试管凝集试验

2.2.3 荧光PCR方法

2.2.4 细菌分离培养鉴定

2.2.4.2 细菌的鉴定

2.2.5 荧光免疫层析法验证试验

3 结果

3.1 血清学检测结果

3.1.1 猪血清检测结果

3.1.2 牛血清检测结果

3.1.3 羊血清检测结果

3.1.4 犬血清检测结果

3.1.5 马血清检测结果

3.2 荧光PCR检测结果

3.3 细菌分离鉴定结果

3.3.1 细菌分离培养

3.3.2 细菌的S/R型鉴定

3.3.3 种属生化鉴定结果

3.4 东莞市人感染布鲁氏菌病资料分析结果

3.5 荧光免疫层析法验证结果

3.5.1 特异性试验结果

3.5.2 敏感性试验结果

3.5.3 稳定性试验结果

3.5.4 临床样品的试验结果

4.1 布鲁氏菌病血清学检测结果分析

4.2 布鲁氏菌病原学检测结果分析

4.3 东莞市人感染布鲁氏菌病例分析

4.4 布鲁氏菌病的防控

4.5 荧光免疫层析技术验证分析

5 总结

致 谢

参考文献