鸭坦布苏病毒卵黄抗体制备

摘要

鸭坦布苏病是鸭的一种烈性传染病，是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus， DTMUV）引起的以蛋鸭的产蛋量下降，严重侵害生殖系统和20日龄左右雏鸭出现头颈震颤，四肢麻痹等神经症状为主要特征的疾病。该病严重影响我国养鸭业的发展，目前尚无有效的治疗措施。　　治疗用抗体属于被动免疫制剂，具有安全、特异、高效、无残留等优点。为了获得一款可用作紧急预防和治疗鸭坦布苏病毒病的被动免疫生物制剂，本研究以临床分离的鸭坦布苏病毒为基础毒株，经RT-PCR定后作10倍稀释，经尿囊腔接种于11日龄麻鸭胚，连续传代7次后，死亡时间集中在3～5 d，死亡胚体全身充血、头颈背部肌肉点状出血，肝脏坏死，病死胚明显小于正常鸭胚。将收集的尿囊液离心去除杂质，再经切向流浓缩。加入β丙内脂灭活病毒，与佐剂按重量比3∶7混合，制成鸭坦布苏病毒灭活疫苗。以该灭活疫苗三次免疫蛋鸡，每次免疫间隔周期为14 d，首免剂量为1 mL/只，二免和三免剂量均为0.2 mL/只，免疫途径均为颈背部和胸部皮下多点注射。三免后两周收集高免鸡蛋，提取蛋黄液。再经过水稀释法抽提、硫酸铵盐析、小型切向流超滤浓缩、透析除盐分离纯化卵黄中的IgY（Immunoglobulin of yolk）抗体。为确定制备卵黄抗体的生物活性，采用间接ELISA试验测定其抗体效价。　　结果显示，以 RT-PCR 方法可从尿囊液中扩增 153 bp 的 DNA 片段，经测序为DTMUV。该毒株的ELD50约为102.9/0.2 mL。制备的灭活疫苗呈乳白色，液质均匀。获得的粗制抗体呈白色半透明，液质均匀。间接ELISA测得卵黄抗体效价达29～210。本试验从临床上鸭坦布苏病病例出发为制备鸭坦布苏病毒灭活苗和卵黄抗体奠定了基础，为有效预防和治疗鸭坦布苏病毒病提供了理论依据和技术手段。然而IgY也有很多问题有待解决，其制备受禽的免疫程序及方式，日龄和品种等各方面影响，其效果评价和质量检测标准也还没有规范。这些因素都会影响抗鸭坦布苏病毒病高免卵黄抗体在实际临床防治应用中的效果。

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