弓形虫ROP2基因的克隆、表达及单克隆抗体制备

摘要

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii，T. gondii）是一种胞内寄生性原虫，呈全球性分布，感染人数达十亿。弓形虫病是一种人畜共患寄生虫病，造成弓形虫脑炎、眼周坏死性炎以及孕妇和孕畜的流产、畸胎及死胎等。主要有三种感染途径：经口感染，血液感染以及胎盘感染，其中经口感染的比例最高，如食入含弓形虫包囊的生肉或水。猫是弓形虫唯一被确认的终末宿主，因此，孕妇应尽量避免与猫接触。迄今为止，市面上暂没有抗弓形虫的疫苗出现，针对弓形虫病患者最为常用且有效的治疗弓形虫病的用药方案是乙胺嘧啶与氨苯磺胺配合使用。　　弓形虫分四个基因型：I型、II型、III型及非典型基因型，均具有感染及侵入机体的能力，其中又普遍以因II型虫株感染而引起的人弓形虫病居多。弓形虫Prugniaud（PRU）株是II型弱毒株，源于法国，偏噬神经细胞，可穿透血脑屏障侵入多种神经细胞，造成脑部的机械损伤及功能障碍。我们的研究以PRU株弓形虫DNA为模板，以Toxo DB上同为II型的ME49虫株的ROP2基因序列为参考序列设计特异性引物，通过PCR扩增得到ROP2目的基因。并经过序列比对，分析验证发现分子克隆所得ROP2目的基因可用于后续的蛋白表达、单克隆抗体（Monoclonal antibodies, mAbs）制备等研究。　　弓形虫 mAbs 具备极大的实用价值，其研究和制备对弓形虫的深入研究具有铺垫作用。根据国内外弓形虫 mAbs 制备案例的相关报导，弓形虫 mAbs 多用于抗原检测方法如夹心 ELISA法等的建立。尽管有报导称 mAbs对弓形虫感染有一定的抵抗作用，但尚未有确切的证据。我们成功的表达了弓形虫 ROP2 目的蛋白，在经过纯化、复性之后接种 KM 小鼠得到能分泌特异性抗 ROP 抗体的 B 细胞，通过与骨髓瘤细胞融合最终制备抗弓形虫 ROP2 抗原的 mAbs。经验证，该抗体可以与ROP2蛋白特异性结合，并且抗体稳定，没有交叉反应。

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