普洱茶提取物减肥功效作用及其机制研究

摘要

普洱茶分为非微生物发酵的生普与微生物发酵的熟普，具有陈化生香和收藏价值。本研究从动物水平和细胞水平探讨普洱茶（生普和熟普）对肥胖小鼠的减肥功效及其分子机制，通过高脂饲料（HFD）构建肥胖小鼠模型和分化试剂构建 成熟脂肪细胞模型，探讨普洱生茶和普洱熟茶提取物对肥胖小鼠体重和脂肪含量的抑制作用，用免疫印迹（ western blot , WB ）和免疫组化（ Histology and immuno-histochemistry staining , IHC）实验技术探讨普洱生茶和普洱熟茶对脂肪合成及分解相关蛋白表达的影响，以期了解普洱生茶和普洱熟茶提取物减肥功效及其作用机理。　　对小鼠进行生普和熟普提取物的灌胃实验，9周后，生普和熟普提取物使肥胖小鼠体重下降，缓解肥胖小鼠的干渴现象，并对小鼠饮食没有影响。解剖对脂肪指数、肝脏指数、肝脏H&E染色进行比较，说明灌胃茶汤的确有效的减少了肥胖小鼠的脂肪量，缓解肝细胞脂肪化现象。　　通过WB和IHC实验，发现生普同熟普提取物通过诱导肝脏中的AMPK磷酸化，以磷酸化的形式抑制ACC活性，生普和熟普提取物显着增加P-AMPK/AMPK和P-ACC/ACC比值，同时增强CPT-1的活性，从而显著抑制FAS的表达，尤其是生普提取物，极显著的表现出对AMPK的磷酸化，刺激ACC的磷酸化从而抑制FAS的表达，这都说明生普与熟普提取物是通过该条通路的脂质代谢相关蛋白来减轻HFD诱导的脂肪代谢异常。　　通过WB实验，在生普和熟普提取物介导下，肝脏中炎症因子IL-1β和iNOS蛋白表达水平下降，从而间接保护肝功能和能量代谢。　　3T3-L1前脂肪细胞诱导分化后细胞内脂滴数量明显增多，且有较大的脂滴出现，脂滴体积增大，说明诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成功。　　在MTT实验中，浓度为0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1 mg/mL、1.25 mg/ mL 和1.5 mg/ mL 的梯度下，生普提取物处理后前脂肪细胞存活率最高为105.19%，最低至30.82%，而熟普提取物处理后前脂肪细胞存活率最高为112.72%，最低为11.94%；浓度分别为 0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1 mg/mL、1.2 mg/mL和1.6 mg/mL的梯度下，而生普提取物对前脂肪细胞干预后的存活率最高为79. 最低至34.95%；而熟普提取物对前脂肪细胞干预后的存活率最高为105%，最低至34.1% 。　　避免由于浓度过高的原因，提取物在细胞生长过程中产生毒性从而对细胞生长产生抑制作用，选用0.25 mg/mL、0.4 mg/mL同0.8 mg/mL作为分化诱导实验诱导给药浓度，模型组油红O染色的脂滴数量明显比正常组染色的脂滴数量多且密，给药组与模型组相比，生普提取物干预下脂滴明显比熟普提取物的数量少。　　选用0.25 mg/mL同0.4 mg/mL作为WB实验浓度，在生普和熟普提取物介导的AMPK通路相关蛋白表达显示，生普同熟普都具有上调P-AMPK和CPT-1，同时下调FAS表达水平和通过增加P-ACC下调ACC蛋白表达量。　　通过WB技术，发现生普和熟普提取物干预下，C/EBPα和PPARγ蛋白表达均降低，通过对3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化的干预实验，生普和熟普提取物均能抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖，且从实验可知，在低浓度下，生普同熟普提取物更能够通过抑制前脂肪细胞的分化，降低成熟脂肪细胞的数量更能有效的减肥，而生普较熟普的减肥效果好。

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