针对人类软骨糖蛋白-39的siRNA表达载体的构建及其对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响

摘要

目的：构建针对人类软骨糖蛋白-39 (HCGP-39，YKL-40)基因的siRNA表达载体，观察其对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响。 方法：化学合成能转录出siRNA的模板DNA 4条，各74个碱基，退火复性成两条双链DNA，双酶切后插入线性化的pSUPER.basic载体的H1启动子下游。重组体采用聚合酶链式反应、限制性内切酶鉴定。把阳性克隆的载体转染胃癌细胞株SGC-7901，观察其对YKL-40的抑制作用：在倒置显微镜下观察细胞形态学变化、采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性、半定量RT-PCR检测YKL-40基因mRNA的表达、流式细胞术检测SGC-7901的细胞周期变化情况。 结果：聚合酶链式反应、限制性内切酶鉴定表明成功地构建了针对YKL-40基因的siRNA表达载体；YKL-40 siRNA能促使胃癌细胞株SGC-7901在X-射线辐照后凋亡；抑制胃癌细胞株SGC-7901在X-射线辐照后的增殖；RT-PCR结果经琼脂糖凝胶电泳显示：SGC-7901经2.5μg YKL-40 siRNA作用48小时后，YKL-40mRNA的表达减少；FCM分析经2.5μg siRNA作用48 h后，亚G<,1>期细胞比例增高，而S期细胞比例减少，G<,1>期细胞增多。 结论：成功地构建了针对YKL-40基因的siRNA表达载体；X-射线可以诱导胃癌细胞株SGC-7901的YKL-40表达；YKL-40 siRNA能抑制YKL-40的表达，使细胞增殖减弱，凋亡增加；初步探讨了YKL-40对胃癌细胞株SGC-7901作用机制，为进一步研究YKL-40基因的生物学作用奠定了基础。

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