小菜蛾鱼尼丁受体SPRY1和SPRY2的晶体结构解析

目录

声明

1 前言

1.1 离子通道简介

1.2 鱼尼丁受体的结构与功能

1.3 鱼尼丁受体与疾病突变

1.4 鱼尼丁受体的研究进展

1.5 昆虫鱼尼丁受体与二酰胺杀虫剂

1.6 小菜蛾鱼尼丁受体的抗性突变

1.7本研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 供试昆虫

2.1.2 主要实验仪器

2.1.3 主要试剂

2.2 实验方法

2.2.1 小菜蛾RNA的提取和反转录

2.2.2小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2功能域的克隆

2.2.3小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2结构域蛋白的表达和纯化

2.2.4小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2的晶体筛选

2.2.5小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2蛋白晶体数据收集与结构解析

2.2.6小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2的热稳定实验

2.2.7小菜蛾RyR同源建模和能量最小化

2.2.8 FKBP蛋白的表达与纯化

2.2.9 用GST-FKBP进行兔子RyR1的纯化

3 结果与分析

3.1小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2结构域的纯化和晶体筛选

3.1.1 SPRY1和SPRY2结构域的镍柱（Ni）亲和层析纯化

3.1.2 SPRY1和SPRY2的多糖树脂(Amylose)亲和层析纯化

3.1.3 SPRY1和SPRY2结构域的钴柱亲和层析

3.1.4 SPRY1和SPRY2结构域的离子交换层析纯化

3.1.5 SPRY1和SPRY2结构域的分子筛层析纯化

3.1.6 SPRY1和SPRY2结构域的晶体筛选

3.2 小菜蛾SPRY1和SPRY2功能域的结构解析

3.3小菜蛾RyR SPRY1和SPRY2结构与哺乳动物结构比较

3.4 小菜蛾SPRY1和SPRY2结构域热稳定分析

3.5 小菜蛾SPRY1和SPRY2结构域在全长RyR中的分析

4 讨论与分析

总结与展望

本研究创新处

参考文献

攻读学位期间的研究成果

致谢