慢性乙型肝炎儿童HBeAg血清学不同临床转归的宿主免疫学特点和儿童肝生化指标性别、年龄特异性参考区间的建立及其在慢性乙型肝炎自然史中的应用

摘要

第一部分 慢性乙型肝炎儿童HBeAg血清学发生不同临床转归的宿主免疫学特点　　目的：分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎儿童HBeAg血清学发生不同临床转归的免疫学特点，筛选与其相关的关键免疫学指标以区分出不同的HBeAg临床结局，为慢性乙型肝炎儿童的随访监测、治疗效果判断提供新的视角。　　方法：纳入 15 名 HBeAg 阳性慢性乙型肝炎儿童，平均随访 2.8年 （范围：0.7-6.2年）。研究结束时根据HBeAg血清学的状态将研究对象分为三组：自发性 HBeAg 清除/转换组（Group1，n=5）、持续性HBeAg阳性组（Group2，n=5）和抗病毒药物诱导的HBeAg血清学转换组（Group3，n=5）。收集血清检测其肝功能、乙肝标志物及HBV-DNA载量等临床指标并采用半定量芯片检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、TGF-β、IL-10、IL-17、IL-22和IL-21等34种细胞因子表达谱。通过检测各组患儿在不同时间点相关细胞因子表达水平，比较与分析其组间差异及其动态变化。应用布尔模型探讨细胞因子与HBeAg不同临床转归之间的关系，并筛选能区分HBeAg不同临床转归的关键免疫学指标。　　结果：自发性 HBeAg 血清学清除/转换组（Group1）的细胞因子表达模式的总体水平较低。抗病毒药物诱导的 HBeAg 血清学转换组（Group3）细胞因子表达水平最高，且在抗病毒治疗发生HBeAg血清学转换后细胞因子表达水平仍较高。在基线时，Group3的IL-1b、IL-6R、IL-17F、IL-21R、MIP-3α及IL-17R、IL-22、IL-28A、GITR的表达水平明显高于其他两组。在随访结束时，Group3的IL-1b、IL-6R、IL-23p19、IL-28A、MIP-3α的表达水平要明显高于其他两组。持续性 HBeAg 阳性组（Group2）的IL-1sRⅠ、IL-1sRⅡ、IL-4、IL-12p40、IL-17F、GITR以及TGF-β3的表达水平随时间进展显著升高。基线GITR、IL-22、IL-21R、IL-17R的表达水平能够较好地区分血清HBeAg不同的临床转归。此外，进一步通过基线GITR、IL-21R的表达情况建立可以判断慢乙肝儿童HBeAg不同临床结局的简易流程。　　结论：HBeAg阳性慢性乙型肝炎儿童发生不同临床转归时宿主细胞因子的表达水平有较大差异，细胞因子表达的总体模式能更好地反映其免疫特征。通过联合基线 GITR、IL-22、IL-21R、IL-17R 的表达水平，能够较好地区分血清HBeAg发生不同临床转归的慢性乙型肝炎儿童，并建立了基于基线GITR和IL-21R表达情况的简易流程来判断HBeAg阳性慢性乙型肝炎儿童血清HBeAg的临床转归。　　第二部分 儿童血清ALT、AST、AKP、GGT的性别和年龄特异性参考区间的建立及其在慢性乙型肝炎自然史中的应用　　目的：建立儿童血清ALT，AST，AKP和GGT的性别和年龄特异性参考区间，并利用新的ALT正常值上限（upper limits of normal，ULN）重新评估儿童慢性乙型肝炎自然史。　　方法：从医院电子数据库系统收集1-14岁健康儿童的年龄、性别及肝生化学等信息。利用百分位数（第3位百分位数-第97位百分位数）确定血清ALT，AST，AKP和GGT年龄和性别特异性的参考区间。计算灵敏度和特异度判断新提出的ALT ULN检出慢性HBV感染儿童的能力。　　结果：基于4232名健康儿童的肝生化学指标检测结果，我们建立了ALT，AST，AKP和GGT年龄和性别特异性的参考区间。与现在的ALT ULN相比，新的ALT阈值区分慢性HBV感染儿童的灵敏度更高（男孩：31.2％，女孩：35.5％），而特异度仅略有下降。HBeAg（+）慢性感染期儿童的肝生化学指标水平随年龄、性别的变化趋势与健康儿童大致相同，但仍存在一些差异。根据新提出的 ALT ULN，大约16.1％的男孩和19.0％的女孩被划分为HBeAg（+）慢性肝炎期，但使用目前的ALT ULN，他们被认为处于HBeAg（+）慢性感染期。　　结论：基于大样本健康儿童人群，我们建立了儿童 ALT，AST， AKP和GGT性别和年龄特异性的参考区间。同时，我们描述了HBeAg （+）慢性感染期患儿的血清肝生化指标水平的特征。并且，新提出的肝生化学指标的参考区间将有助于我们了解健康儿童及HBeAg（+）慢性感染期儿童的肝功能特征和慢性HBV感染患儿的自然史。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

第一部分 慢性乙型肝炎儿童HBeAg血清学发生不同临床转归的宿主免疫学特点

前言

1材料

1.1研究设计

1.2患者来源

1.3入选标准和排除标准

1.4主要试剂

1.5主要实验仪器

2方法

2.1实验室检查

2.2细胞因子检测和分析

2.3统计学分析

3结果

3.1患者的一般特征

3.2慢性乙型肝炎儿童细胞因子的表达水平及其动态变化

3.3应用布尔模型探讨HBeAg阳性慢性乙型肝炎儿童发生不同临床转

3.4基于基线关键免疫指标建立区分HBeAg阳性慢性乙型肝炎儿童发

4讨论

小结

参考文献

第二部分 儿童血清ALT、AST、AKP、GGT的性别和年龄特异性参考区间的建立及其在慢性乙型肝炎自然史中的应用

前言

1研究对象

2方法

2.1临床资料收集

2.2实验室检查及质控

2.3统计分析

3结果

3.1一般情况

3.2基于健康儿童队列建立血清ALT，AST，AKP和GGT的年龄和性别特异性参考区间

3.3验证新建立的ALT正常值上限对慢性HBV感染儿童的检出能力

3.4 HBeAg阳性慢性感染期儿童的血清ALT、AST、AKP及GGT特点

3.5重新评估慢性HBV感染儿童的自然史

4讨论

小结

参考文献

文献综述:慢性乙肝病毒感染免疫耐受研究进展

参考文献

致谢

攻读博士期间发表论文及科研情况