胰腺星状细胞中Hic-5对胰腺癌细胞生物学行为的影响

摘要

目的：通过研究胰腺星状细胞（pancreatic stellate cell，PSC）和胰腺癌细胞共培养体系中胰腺星状细胞 Hic-5基因表达下调对胰腺癌细胞的生长增殖、凋亡、侵袭迁移等生物学行为能力的影响，为 Hic-5作为胰腺癌浸润转移的新兴标志物的研究及基因靶向治疗奠定初步的理论和实验基础。　　方法：1.分别以0 pmol（A组）、6.25 pmol（B组）、12.5 pmol（C组）、25 pmol（D组）和50 pmol（E组）的siRNA沉默胰腺星状细胞的Hic-5基因，转染6小时后RT-PCR检测各实验组中胰腺星状细胞的Hic-5mRNA表达，免疫荧光法检测胰腺星状细胞中Hic-5表达；Western blot检测各实验组胰腺星状细胞中的Hic-5蛋白表达；2.分别以A组、B组、C组、D组和E组胰腺星状细胞与相同的胰腺癌细胞a组、b组、c组、d组、e组行共培养48h；3.共培养结束后，采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭迁移能力变化；采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测各组胰腺癌细胞增殖率变化；采用流式细胞法检测各组胰腺癌细胞凋亡率变化；采用免疫荧光法和 Western blot检测各组胰腺星状细胞中 MMP-9（matrix metalloproteinases-9，MMP-9）表达变化。　　结果：1.Hic-5表达在胰腺星状细胞的细胞质中，胰腺星状细胞Hic-5 mRNA和Hic-5蛋白表达量随Hic-5 siRNA转染浓度增大逐渐减少，与A组比较，C组、D组和E组减少明显，差异具有统计学意义（P<0.05）；各实验组中胰腺星状细胞Hic-5免疫荧光强度随Hic-5 siRNA转染浓度增大逐渐减少，与A组比较， D组和 E组减少明显，其差异具有统计学意义（P<0.05）。2.随着胰腺星状细胞Hic-5 siRNA转染浓度增大，与之对应的各组胰腺癌细胞相对迁移距离逐渐减小，与a组比较，d组和e组胰腺癌细胞相对迁移距离减小明显，其差异具有统计学意义（P<0.05）；各组胰腺癌细胞穿膜细胞数逐渐减少，与a组比较，c组、d组和e组胰腺癌细胞穿膜数量减少明显，其差异具有统计学意义（P<0.05）；各组胰腺癌细胞凋亡率逐渐增大；各组胰腺癌细胞增殖率逐渐减小，与a组比较c组、d组和e组胰腺癌细胞增殖率有显著减小，其差异具有统计学意义(P<0.05）；各组胰腺星状细胞MMP-9蛋白表达量和荧光强度逐渐减少，与 A组比较，C组、D组和 E组细胞 MMP-9蛋白表达量和免疫荧光强度减少明显，其差异具有统计学意义（P<0.05）。　　结论：1.Hic-5 siRNA序列在胰腺星状细胞中取得较好的转染效率；2.成功建立 Hic-5沉默后的胰腺星状细胞与胰腺癌细胞共培养模型；3.Hic-5的siRNA可有效抑制胰腺星状细胞中 Hic-5的表达，同时降低其MMP-9蛋白表达；4.胰腺星状细胞中Hic-5表达的下调可显著降低胰腺癌细胞增殖能力，增加胰腺癌细胞凋亡能力，同时降低胰腺癌细胞的侵袭、迁移能力。

目录

前言

材料与方法

1.实验材料与仪器

2.主要实验试剂与仪器

3.试剂的配制

第一部分Hic-5 siRNA序列合成、转染胰腺星状细胞与转染后基因沉默效果检测

1.胰腺星状细胞Hic-5基因的沉默

2.转染效率的检测

3.统计方法

结果

讨论

第二部分 胰腺星状细胞Hic-5 siRNA后对胰腺癌细胞生物学行为的影响

1. 细胞培养

2. 胰腺癌细胞增殖率检测

3. 胰腺癌细胞凋亡检测

4. 胰腺癌细胞划痕实验

5. 胰腺癌细胞迁移实验

6. Western-blot检测胰腺星状细胞MMP-9蛋白的表达

7. 免疫荧光检测胰腺星状细胞MMP-9表达

8. 统计方法

结果

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:胰腺癌与胰腺星状细胞关系研究进展

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