T2DM肾病大鼠肾动脉BKCa通道mRNA的表达与肾脏病变相关性研究

摘要

目的：揭示不同病程2型糖尿病（Type2 diabetes mellitus,T2DM）肾病大鼠肾动脉大电导钙激活钾通道(BKCa）基因表达变化与肾脏病变之间有无相关性。方法：1.建立模型：适应性喂养一周后，将60只SD大鼠随机分组，对照组（10只）和模型组（50只）。模型组进行左肾切除手术，对照组进行左肾切除假手术。模型组喂高脂高糖饲料（主要配料为10％猪油，2.5%胆固醇,20%蔗糖，1%胆酸盐，66.5%常规饲料）；对照组仅喂饲普通饲料。第4周时模型组大鼠腹腔注射一次STZ25mg·kg-1；对照组仅注射同体积柠檬酸缓冲液。三天后，断尾采血测量空腹血糖筛选出符合空腹血糖≥7.0mmol·L-140只大鼠继续喂养，建模时间8周（20只）和12周（20只）。于8周和12周处死大鼠前一天用代谢笼收集24h尿液测量微量尿蛋白。第二天先测空腹血糖，再测量大鼠体重，然后麻醉大鼠腹主动脉采血测血肌酐和血尿素氮，取肾动脉，采集右肾测其重量。2.T2DM肾病模型的鉴定：①FBG≥7.0mmol·L-1，PBG≥11.0mmol·L-1且伴有胰岛素敏感性（Insulin sensitive index，ISI）降低者；②糖尿病肾病早期肾脏肥大；③出现微量白蛋白尿，为成模指标。3.肾脏生化指标检测：大鼠麻醉后，打开腹腔，腹主动脉采血离心取血清，用全自动生化分析仪检测血尿素氮、血肌酐和尿蛋白。4.HE染色：喂养8周和12周的大鼠经麻醉和腹主动脉采血处理后，取部分肾组织置于10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋、切片、脱蜡、HE染色、透明、封片等处理，应用光镜观察肾脏组织结构变化。5.电镜观察：另取部分肾组织置于2.5%戊二醛固定，常规脱水、渗透、包埋、切片等处理，应用电镜观察肾脏组织超微结构变化。6.实时荧光定量PCR：大鼠经麻醉和腹主动脉采血后，采集肾动脉测定BKCa通道的ɑ,β1亚单位的表达水平。提取各组总RNA,逆转录成cDNA，用引物和SYBRgreen染料进行扩增。结果：(1)T2DM肾病大鼠模型建立：与对照组比较，①8周、12周大鼠的 FBG≥7.0mmol·L-1，2h PBG≥11.0mmol·L-1且ISI降低（P<0.05）；②糖尿病肾病早期出现肾脏肥大，用肾脏肥大指数的指标来表示（P<0.05）；③出现微量白蛋白尿，用24h尿蛋白来表示（P<0.05）。(2)肾脏病变生化指标：8周、12周模型组血肌酐和血尿素氮浓度分别为44.00±4.07，49.73±2.98和6.28±1.40，9.90±1.55，与对照组比较，其浓度明显增加（P<0.05），且12周比8周浓度增加更加明显。(3)肾脏病变形态学指标：①HE染色：与对照组比较，8、12周模型组肾小球及肾小管均有病理改变，可见程度不同的肾小球系膜细胞增生。②电镜观察结果：与对照组比较，8、12周模型组均可见基底膜均质性增厚、部分足突融合、脱落，系膜区基质增多。(4)在病程8周、12周T2DM肾病大鼠 BKCaɑ亚单位在肾动脉的表达量没有明显变化；(5)在病程8周、12周 T2DM肾病大鼠 BKCaβ1亚单位在肾动脉中的表达量降低。结论：(1)T2DM肾病大鼠模型建立成功。(2)T2DM肾病大鼠肾脏病变，8周，12周模型组较对照组有明显变化，且12周肾脏病变更明显。(3)T2DM肾病大鼠BKCa通道β1亚单位的表达量在病程8周，12周降低，且12周降低明显，与肾脏的病变可能存在相关性。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 实验动物

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学处理

结果

1 大鼠T2DM肾病模型建立

2 肾脏病变生化指标监测结果

3 HE染色光镜观察结果

4 电镜观察结果

5 PCR结果

讨论

1 糖尿病肾病模型建立

2 大电导钙激活钾通道与糖尿病

3 大电导钙激活钾通道与糖尿病肾病

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述：大电导钙离子激活钾通道在糖尿病及并发症中的研究进展

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