GRK6、Connexin26在胃癌中的表达及意义

摘要

目的：GRK6和 Connexin26(Cx26)蛋白都在细胞通信中发挥了作用，两者差异的是，GRK6蛋白是属于GRK超家族的一员，作为人体内十分必要的一类蛋白激酶，或者称之为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可以通过多条生理途径参与到机体中细胞与细胞之间信号转导的调节和控制[1,2]；而 Cx26蛋白归类于 Cx家族的成员，可以十分广泛地在人体各种组织器官上，尤其在上皮细胞上常常是高表达，是构成细胞之间主导物质交换和信号传递等作用的间隙连接通道蛋白的基本构成元件，主要参与调节机体内细胞的增殖、分化、代谢等生命活动[3,4]。但目前两者在胃粘膜细胞发生不同病变时，包括在正常胃粘膜组织，不同程度不典型增生和不同类型胃癌细胞中的表达和作用研究的报告尚少。近年来，学者在对胃恶性肿瘤及其各种癌前病变的研究中发现，伴有不良预后的胃癌患者常伴随有GRK6蛋白的高表达，如肿瘤细胞的分化不佳、浸润生长，以及经血液和淋巴结转移等[5]；而 Cx26在细胞胞质中的高表达，可以干扰胃癌细胞的发生、发展，可能对癌前病变细胞和胃癌细胞进展有一定程度的抑制功效[6]。由于肿瘤的分化级别、浸润深度、体积大小，还有淋巴结和血液途径转移因素等和胃癌患者的预后关联性巨大，为了能进一步提升胃癌患者的生存时间，和改善其生活质量，我们可以深入探究不同种类胃癌及其癌前病变中发生及进展可能存在的分子生物学机制；找到可能针对胃癌的早期诊断、后期治疗，以及评估预后的一类高效、牢靠的分子生物学的特异性标志；以及寻找新的潜在的治疗及预后监测靶点。因此本实验通过观察GRK6及Cx26蛋白在胃癌、相应癌旁正常胃粘膜组织，还有胃粘膜不同程度的不典型增生细胞中的表达情况，归纳上述两种蛋白在相应组织细胞之间的差别性表达情况，探究两者蛋白跟着细胞类型的进展在相应组织中的表达、变化特点，以及两种蛋白在各自组织细胞中表达的关联性，以及可能存在的机理，探讨GRK6及Cx26蛋白在胃癌诊断、治疗及预后评估中的可能具有的临床应用意义。　　方法：1.本实验首先统计西南医科大学附属医院的病理科从2013年1月到2014年2月的存档病理蜡块，并从中随机选取本实验标本，包含行外科手术切除胃部肿瘤标本蜡块，以及消化内镜室活检后确诊为胃肿瘤的组织标本蜡块，总计169例。其中包含了82例胃癌组织，52例不典型增生组织，35例正常胃粘膜组织（距离肿瘤边界5cm以上）。应用免疫组织化学方法分别检测GRK6、Cx26蛋白在各组组织细胞间表达差异的关系，分析GRK6和Cx26两类蛋白在胃粘膜细胞各个病变组织中相互间的关联性。2.将观察结果按照 Shimizu标准评分法来进行评价。依照每张切片中被阳性染色细胞的染色程度和染色强度计算得分。3.将得分结果统计并利用SPSS21.0软件进行统计学指标分析，主要采用卡方检验、相关性分析，以及确切概率计算法统计。检验水准定义P<0.05，认定差异明显，具有统计学意义。　　结果：1. GRK6蛋白在正常胃粘膜组、轻中度不典型增生组、重度不典型增生组，以及肠型胃癌组和弥漫型胃癌组表达的阳性率分别为0％、0%、3.3%、41.5%、65.5%，其中在82例胃癌组织当中，有41例 GRK6蛋白阳性表达，表达率为50.0%，位于癌旁的正常胃粘膜组织中均未观察到GRK6蛋白的阳性表达，表达率为0%（χ2=12.761，P=0.000），重度不典型增生组织中 GRK6的阳性表达1例，表达率为3.3%（χ2=28.228， P=0.000），正常胃粘膜组织及不典型增生组中的GRK6表达阳性的水平，都明显少于胃癌组织中GRK6的阳性表达水准(P<0．05），差异明显，认为有统计学意义。2.Cx26蛋白在正常胃粘膜分组、轻中度不典型增生分组、重度不典型增生分组、肠型胃癌分组、弥漫型胃癌分组表达的阳性率分别是2.9%、4.6%、10.0%、47.2%、24.1%，其中82例胃癌组织中有32例Cx26蛋白阳性表达，表达率为39.0%，胃癌中的肠型阳性表达比例是47.2%，弥漫性胃癌阳性表达比值是24.1%，弥漫性胃癌Cx26阳性表达率明显低于肠型胃癌（χ2=4.179，P=0.041），癌旁正常组织中 Cx26蛋白阳性表达1例，表达率为2.9%（x2=16.718，P=0.000），不典型增生组织中Cx26蛋白的阳性表达4例，表达率为7.7%（χ2=10.182，P=0.001），正常胃粘膜组织及不典型增生组的 Cx26蛋白阳性表达水准，都明显低于胃癌组织中 Cx26蛋白的阳性表达水准(P<0.05），差异明显，认定有统计学意义。3.GRK6和Cx26蛋白的表达情形和病人的性别、年龄均无显著相联性(P>0.05)，两者蛋白表达情形与肿瘤类型有关，在肠型胃癌中，Cx26蛋白表达的阳性情况大大多于弥漫型胃癌，GRK6则恰恰相反。4. GRK6的表达与Cx26的表达呈负性相关的关系，提醒在胃癌中GRK6的表达随Cx26的表达减少而增加。　　结论：　　1.GRK6在胃癌细胞中呈现阳性高表达，并伴随肿瘤浸润深度加深、淋巴结转移及病理分级低下等不良因素，其表达程度逐渐上升，暗示GRK6可能参与了胃癌侵袭、转移。　　2.Cx26蛋白在胃癌组织中较正常胃粘膜组织表达大大增多，并伴有表达部位的改变，且与胃癌的组织学类型、肿瘤侵犯深度和浸润范围，以及是否伴随着淋巴结受侵袭及分化程度密切相关,提示 CX26可抑制胃癌的进展及侵犯转移，可能与其促进细胞分化有关。　　3.GRK6和Cx26蛋白在胃癌细胞中表达情形呈现负性相关，提示Cx26可能通过抑制GRK6的功能，进而抑制胃癌的浸润转移。　　4.通过检测和分析胃癌组织中GRK6和Cx26蛋白表达情况，有希望能够使其变成评判胃癌转移和预后评估的生物学标志，进一步研究有效、可行的GRK6和Cx26胃癌靶向药物，可以为胃癌患者提出新的诊疗思路及措施。

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前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 免疫组化结果判定

6 统计学方法

结果

1 GRK6蛋白检测结果

2 Cx26蛋白检测结果

3 GRK6、Cx26蛋白在胃癌组织中的相关的表达性

4 HE染色光镜观察结果

讨论

1 信号通路与胃癌研究及其意义

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:间隙连接蛋白在胃癌发生机制中的相关性研究

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