tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜VEGF及Bcl-2表达的影响及保护作用

摘要

目的：采用高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(Streptozocin，STZ)建立2型糖尿病大鼠模型，观察叔丁基对苯二酚(tert-Butyl Hydroquinone，tBHQ)对2型糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及B细胞白血病/淋巴瘤2(B-cell leukemia/lymphoma-2，Bcl-2)表达的影响，探讨tBHQ通过Nrf2/ARE信号通路对2型糖尿病大鼠视网膜的保护作用。　　方法：50只清洁级健康雄性成年SD大鼠随机分为正常对照组和模型建立组。模型建立组予以高脂高糖饲料喂养4w，空腹12h后以链脲佐菌素(streptozocin，STZ)按体质量30mg/kg腹腔注射诱导建立2型糖尿病大鼠模型，再选取造模成功大鼠随机分为糖尿病组（继续喂以高脂高糖饲料），tBHQ干预组（成模一周后在高脂高糖饲料中添加1％ tBHQ继续喂养），4w、12w后观察3组大鼠的空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)。放射免疫分析法检测空腹血清胰岛素(FINs)含量。免疫组织化学法检测糖尿病大鼠视网膜中VEGF、Bcl-2的表达。采用Real-Time qRT-PCR法定量检测视网膜组织中Bcl-2，VEGF mRNA表达。　　结果：35只大鼠成功建立2型糖尿病模型，成模率87.5％。各组大鼠FPG比较，差异有统计学意义(F分组=78.531，P=0.000)。糖尿病组及tBHQ干预组的FINs较正常组升高，差异有统计学意义（F分组=22.480，P=0.000;F时间=7.636，P=0.008）。糖尿病组的TC、TG较正常对照组与tBHQ干预组显著升高，差异有统计学意义（TC:F分组=28.049，P=0.000; TG: F分组=13.108，P=0.000）。糖尿病组及tBHQ干预组的LDL较正常组明显增高（F分组=6.804，P＜0.05）。免疫组化结果显示:Bcl-2、VEGF蛋白主要表达于各层视网膜血管、节细胞层、内核层、外核层。糖尿病组VEGF蛋白表达量显著高于正常组与tBHQ干预组，不同分组比较差异具有统计学意义(F分组=11.805，P=0.000)。Bcl-2蛋白在正常组、糖尿病组、tBHQ干预组的表达呈递增趋势，且12w的表达量比4w明显增高，不同分组及时间的表达差异具有统计学意义（F分组=22.943，P=0.000;F时间=7.170，P=0.08）。Bcl-2在tBHQ干预组12w的表达量相较于4w明显增多，差异有统计学意义（t=-3.013，P=0.004）。Real-TimeqRT-PCR结果显示:VEGF mRNA在糖尿病组中的表达量显著高于正常组和tBHQ干预组，不同分组及时间比较差异有统计学意义（F分组=79.220，P=0.000;F时间=6.090，P＜0.05）;tBHQ干预组的Bcl-2mRNA表达量高于糖尿病组和正常组，且糖尿病组的表达量高于正常组，差异有统计学意义（F分组=105.000，P=0.000;F时间=13.17，P＜0.05），tBHQ干预组12w相对于4w明显升高(t=-7.047，P＜0.05)。　　结论：⑴采用高糖、高脂饮食联合小剂量STZ腹腔注射可成功制备2型糖尿病及糖尿病视网膜病变模型；⑵tBHQ对糖尿病大鼠可能有对抗高血糖、调节胰岛素、降低血脂的作用；⑶tBHQ可能通过减少VEGF及增加Bcl-2的表达对糖尿病视网膜病变起到抗氧化损伤和抗凋亡的作用。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

结果

1 模型建立

2 一般情况

3 生化指标

4 视网膜光镜形态学观察

5 免疫组化结果

6．荧光定量PCR检测结果

讨论

1 实验动物模型的建立

2 DR的形态学改变

3 Bcl-2、VEGF与DR

4 tBHQ对DR的干预作用

结论

参考文献

英汉略缩词对照表

致谢

综述 糖尿病视网膜病变与凋亡相关因子的研究进展

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