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摘要
第1章 综述
1.1 达托霉素概述
1.1.1 达托霉素的理化性质
1.1.2 达托霉素抑菌活性和作用机制
1.1.3 达托霉素的临床研究及应用
1.1.4 达托霉素的生物合成
1.2 达托霉素产生菌S.roseosporus的代谢工程改造
1.2.1 提高达托霉素产量
1.2.2 寻找达托霉素结构类似物
1.3 whiB-like(wbl)基因家族
1.3.1 wbl基因家族的发现
1.3.2 wbl基因家族的生物学功能
第2章 绪论
第3章 实验材料和方法
3.1 材料
3.1.1 菌株及质粒
3.1.2 培养基
3.1.3 常用抗生素
3.1.4 引物
3.1.5 实验试剂
3.1.6 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 常规实验方法
3.2.2 接合转移体系的优化
3.2.3 whiB4敲除突变株和过表达菌株的构建和筛选
3.2.4 达托霉素生物活性检测以及菌体生长曲线测定
3.2.5 RNA提取, RT-PCR,RT-qPCR
第4章 实验结果与分析
4.1 S.roseosporus遗传转化系统的优化
4.1.1 抗生素最小抑菌浓度(MIC)的测定
4.1.2 培养基对接合转移的影响
4.1.3 抗生素覆盖时间和受体孢子数对接合转移的影响
4.1.4 转化于的稳定性考察
4.1.5 接合转移接台子的验证
4.1.6 安普霉素抗性基因的特异性敲除
4.2 S.roseosporus 15998中whiB4基因的克隆和生物信息学分析
4.3 whiB4敲除和过表达载体的构建
4.4 whiB4突变菌株的筛选
4.4.1 whiB4敲除突变株的筛选
4.4.2 whiB4过表达菌株的筛选
4.4.3 whiB4敲除突变株的遗传互补
4.5 whiB4敲除突变株的表型观察
4.6 whiB4阻断和过表达对达托霉素生物合成的影响
4.6.1 whiB4敲除对达托霉素生物合成的影响
4.6.2 过表达对达托霉素生物合成的影响
4.7 基因dptE和whiB4转录水平差异分析
4.7.1 总RNA的提取
4.7.2 基因dptE和whiB4转录水平检测及分析
第5章 讨论与展望
5.1 whiB4对S.roseosporus15998生长发育的影响
5.2 whiB4对达托霉素生物合成的影响
5.3 展望
参考文献
硕士期间发表论文和奖励情况
致谢
西南大学;