达托霉素产生菌玫瑰孢链霉菌SWU2010遗传转化体系的建立和优化

摘要

目的:对玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)中的功能基因进行研究，构建达托霉素高产菌株。方法:分别以基因整合型质粒pSETl52和自主复制质粒pKC1139为出发质粒，E.coli ET12567(PUZ8002,pSETl52/pKC1139)为供体，S.roseosporus SWU2010孢宇为受体，选择MS、AS-1、TSB琼脂培养基作为接合转移的培养基进行试验。结果:AS-培养基是接合转移的最佳培养基。孢子的预萌发条件为50℃热激lOmin，转化效率达10-6～10-3，抗生素1618h覆盖效果最好。结论:探索了玫瑰孢链霉菌的接合转移系统，确定了玫瑰孢链霉菌的最佳接合转移条件，并利用己建立好的接合转移的体系实现了安普霉素抗性基因的特异性敲除，为实现基因工程菌株的构建和提高玫瑰孢链霉菌的产抗能力奠定了重要基础。