耐草甘膦基因aroAA1501的拆分及功能重建

目录

声明

主要符号对照表

第一章 引 言

1.1 耐草甘膦转基因作物

1.1.1 草甘膦的作用机制

1.1.2 耐草甘膦转基因作物的培育途径

1.1.3 耐草甘膦转基因作物的应用

1.2 草甘膦抗性杂草

1.2.1 草甘膦抗性杂草的种类

1.2.2 草甘膦抗性杂草的产生途径

1.3 限控基因飘流的生物学措施

1.3.1 叶绿体转化

1.3.2 转基因弱化技术(Transgenic mitigation，TM）

1.3.3 选择性灭杀技术

1.3.4 基因删除技术

1.4 蛋白内含肽

1.4.1 蛋白内含肽的分类

1.4.2 蛋白内含肽的剪接机制

1.4.3 蛋白内含肽的应用

1.5 基因拆分技术

1.6 研究目的及意义

第二章 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 质粒与菌株

2.1.3 酶和试剂

2.1.4 主要仪器

2.1.5 培养基配制

2.1.6 引物合成和测序

2.2 试验方法

2.2.1 基因拆分及融合基因An-In和Ic-Ac的克隆

2.2.2 原核表达载体的构建

2.2.3 功能互补试验

2.2.4 ER2799重组菌株的草甘膦耐受性检测

2.2.5 ER2799重组菌株中外源基因的RT-PCR检测

2.2.6 实时荧光定量PCR检测

2.2.7 ELISA检测

2.2.8 EPSPS 酶动力学分析试验

2.2.9 基因拆分后重新组装方式分析

2.2.10 水稻转化用植物表达载体构建

2.2.11 水稻遗传转化

2.2.12 转基因水稻PCR检测

第三章 实验结果

3.1 耐除草剂基因aroAA1501可拆分位点的确定

3.1.1 原核表达载体的构建

3.1.2 ER2799的功能重建

3.2 ER2799重组菌株的草甘膦耐受性分析

3.2.1 ER2799重组菌株的草甘膦耐受性

3.2.2 ER2799重组菌株在不同草甘膦浓度下的生长曲线

3.3 ER2799重组菌株中外源基因的表达分析

3.4 EPSPS酶动力学分析

3.4.1 酶活力

3.4.2 草甘膦半数抑制常数IC50

3.4.3 米氏常数Km

3.4.4 竞争性抑制剂草甘膦的Ki值

3.5 不同类型转基因水稻的培育

3.5.1 植物表达载体的构建

3.5.2 转基因水稻的培育

3.5.3 转基因水稻的抗性分析

第四章 讨论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

附录A

个人简历