猫传染性腹膜炎病毒抑制Ⅰ型干扰素通路分子机制研究

目录

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主要符号对照表

第一章 绪论

1.1 猫传染性腹膜炎及猫传染性腹膜炎病毒的研究进展

1.1.1 猫传染性腹膜炎的流行病学

1.1.2 猫传染性腹膜炎临床症状

1.1.3 猫传染性腹膜炎病毒致病机制

1.1.4 猫传染性腹膜炎病毒基因组及编码蛋白

1.1.5 猫传染性腹膜炎病毒和猫肠道冠状病毒的鉴定

1.2 宿主抗病毒天然免疫

1.2.1 TLRs介导的信号通路

1.2.2 RLRs介导的信号通路

1.2.3 DNA受体介导的信号通路

1.3 冠状病毒调控干扰素信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫

1.4 本研究的目的和意义

第二章 FIPV感染调控宿主RLR信号通路抑制I型干扰素应答

2.1 材料和方法

2.1.1 毒株和细胞

2.1.2 主要试剂和实验仪器

2.1.3 猫IFN-β荧光素酶报告质粒的构建

2.1.4 鼠源N蛋白多克隆抗体的制备

2.1.5 细胞转染

2.1.6 细胞总RNA的提取和反转录

2.1.7 FIPV-DF2感染对IFN-β启动子活性检测

2.1.8 FIPV-DF2感染对IFN-β和ISGs mRNA检测

2.1.9 FIPV-DF2感染对I型干扰素通路激活分析

2.1.10 FIPV-DF2感染对SeV或poly(I:C)诱导的IRF3启动子活性激活分析

2.1.11 FIPV-DF2感染对IRF3磷酸化分析

2.1.12 FIPV-DF2感染对IRF3在CRFK细胞中定位分析

2.1.13 数据分析

2.2 结果

2.2.1 FIPV-DF2感染不能诱导IFN-β应答和ISGs表达

2.2.2 FIPV-DF2感染剂量依赖性的抑制I型干扰素通路激活

2.2.3 FIPV-DF2感染通过阻断IRF3通路抑制IFN-β应答

2.3 讨论

第三章 FIP V nsp5通过多位点切割NEMO抑制I型干扰素应答

3.1材料和方法

3.1.1 毒株和细胞

3.1.2 主要试剂和实验仪器

3.1.3真核表达质粒的构建

3.1.4 FIPV-nsp5过表达对IFN-β应答的作用分析

3.1.5 FIPV-nsp5过表达对RLR信号通路作用分析

3.1.6 FIPV-nsp5对RLR信号通路接头分子切割分析

3.1.7 蛋白酶活性和凋亡相关降解途径对FIPV-nsp5介导NEMO切割的影响

3.1.8 FIPV-nsp5切割NEMO位点分析

3.1.9 FIPV-DF2感染对内源性NEMO切割分析

3.1.10 NEMO切割产物对干扰素信号通路激活分析

3.1.11 FIPV-DF2感染对IRF3磷酸化的影响

3.1.12 FIPV-nsp5过表达对NEMO与TANK相互作用的影响

3.2结果

3.2.1 FIPV-nsp5抑制IFN-β应答呈剂量依赖性且依赖其蛋白酶活性

3.2.2 FIPV-nsp5抑制RIG-I介导的I型干扰素信号通路

3.2.3 FIPV-nsp5切割RLR信号通路中的接头分子NEMO

3.2.4 FIPV-nsp5切割NEMO依赖其蛋白酶活性

3.2.5 FIPV-nsp5切割NEMO位点

3.2.6 内源性NEMO在感染FIPV-DF2的CRFK细胞中被切割

3.2.7 FIPV-nsp5通过切割NEMO抑制RIG-I介导的I型干扰素信号通路

3.3 讨论

第四章 结论

参考文献

致 谢

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