苹果炭疽叶枯病菌GTP结合蛋白GTPBP1的功能分析

目录

声明

主要符号对照表

第一章 绪论

1.1 苹果炭疽叶枯病概述

1.1.1 苹果炭疽叶枯病

1.1.2 苹果炭疽叶枯病病原

1.1.3 炭疽菌属真菌的侵染过程

1.1.4 苹果炭疽叶枯病的防治

1.2 胶孢炭疽菌致病分子机理研究

1.2.1 苹果炭疽叶枯病菌致病相关基因的研究

1.2.2 信号传导相关基因的研究

1.2.3 与酶相关基因的研究

1.2.4 苹果炭疽叶枯病菌效应蛋白研究进展

1.2.5 结合蛋白GTPBP1的研究

1.3 本文研究的目的与意义

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 供试菌株

2.1.2 质粒载体

2.1.3 植物材料

2.1.4 试剂

2.1.5 供试抗生素

2.1.6 供试培养基

2.1.7 仪器

2.2 试验方法

2.2.1 GTPBP1基因的克隆

2.2.2 侧翼序列的分析

2.2.3 苹果炭疽叶枯病菌GTPBP1基因敲除载体构建

2.2.4 苹果炭疽叶枯病菌基因GTPBP1基因回补载体构建

2.2.5 农杆菌介导的苹果炭疽叶枯病菌的遗传转化

2.2.6 转化子的筛选、纯化和DNA的提取

2.2.7 转化子的反转录及荧光定量PCR

2.2.8 苹果炭疽叶枯病菌表型测定

2.2.9 生物学和致病关联基因的qRT-PCR检测

第三章 结果

3.1 GTPBP1基因的致病性鉴定

3.1.1 致病性缺陷突变体菌株的鉴定

3.1.2 T-DNA插入突变体标记基因的鉴定和生物信息学分析

3.1.3 敲除突变体ΔGTPBP1的获得

3.1.4 ΔGTPBP1回补菌株的获得

3.1.5 GTPBP1基因的致病性鉴定

3.2 GTPBP1基因的生物学和致病机制解析

3.2.1 GTPBP1蛋白的亚细胞定位

3.2.2 ΔGTPBP1突变体菌丝和分生孢子的形态观察

3.2.3 ΔGTPBP1突变体附着胞形成的观察

3.2.4 ΔGTPBP1突变体不能穿透寄主表皮

3.2.5 ΔGTPBP1突变体的抗胁迫反应

3.2.6 生物学和致病关联基因的荧光定量分析

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

附录A

附录B

附录C

附录D

致谢

作者简历